第二章 基因工程制药.pptVIP

一、医药生物技术产品质量保证的一般性要点 3. 严格控制条件 宿主细胞中表达的天然基因，转录或翻译后，或精制、工艺放大过 程中，都有可能发生变化，故从原料到制成品制备全过程的每一步都 须严格控制条件与鉴定质量，确保符合标准规格、平安有效。 谢谢欣赏 2021-5-18 二、生物材料的质量控制 原材料的质量控制是要确保编码药品的DNA序列的正确性， 重组微生物来自单一克隆，所用质粒纯而稳定，以保证产品质量的 平安性和一致性，所以原材料的质量控制主要是对目的基因、表达 载体以及宿主细胞的检查。 谢谢欣赏 2021-5-18 1.目的基因 根据指控要求，需明确目的基因的来源、克隆经过；对于改造 过的基因应说明被修改的密码子、被切除的肽段及拼接的方法； 使用PCR技术扩增得到的基因，应说明扩增的模板、引物及酶反响 条件等情况，并以限制性内切酶酶切图谱和核苷酸序列等分析方法 确证基因结构的正确无误。 二、生物材料的质量控制 谢谢欣赏 2021-5-18 2. 表达载体 应提供表达载体的名称、结构、遗传特性及其各组成局部(如复制 子、启动子)的来源与功能，构建中所用位点的酶切图谱，抗生素抗性 标记物等。 二、生物材料的质量控制 谢谢欣赏 2021-5-18 3.宿主细胞 应提供宿主细胞的名称、来源、传代历史、检定结果及其 生物学特性等；需说明载体引入宿主细胞的方法及载体在宿主 细胞内的状态，是否整合到染色体内及拷贝数，并证明宿主细 胞与载体结合后的遗传稳定性；提供插入基因与表达载体两侧 端控制区内的核苷酸序列，详细表达在生产过程中，启动与控 制克隆基因在宿主细胞中表达的方法及水平。 二、生物材料的质量控制 谢谢欣赏 2021-5-18 1. 选择适宜的宿主菌 2. 选择适宜的载体 3. 选择压力 4. 分阶段控制培养 5. 控制培养条件 6. 固定化 二、提高质粒稳定性的方法 谢谢欣赏 2021-5-18 一、工程菌选择 二、反响器〔发酵罐〕设计 三、发酵培养基组成 四、工艺最正确化与参数监测控制 第五节 基因工程菌中试 谢谢欣赏 2021-5-18 一、基因工程菌的培养方式 二、基因工程菌的培养工艺 三、基因工程菌的培养设备 第六节 重组工程菌的培养 谢谢欣赏 2021-5-18 基因工程产品纯化前的性质： ①目的产物在体系中含量较低 ②体系中组份复杂〔细胞、代谢物、残留培养基及无机盐等〕 ③目的产物稳定性差：对pH、温度、金属离子、有机溶剂、 剪切力、外表活性剂等十分敏感，容易失活、变性。 第七节 基因工程药物的分离纯化 谢谢欣赏 2021-5-18 一、建立分离纯化工艺需了解的各种因素 1. 含目的产物的初始物料的特点 利用基因工程菌进行发酵生产的产物，其上游过程中的各种因素 均对别离纯化技术和工艺有直接影响。这些因素包括： 〔1〕菌种类型、形式，各种生物学性质，产物和副产物种类、 产物在细胞内所处的位置，表达方式〔胞内、胞外、包含体〕， 代谢物种类，产物类似物、毒素和能降解产物的酶类等； 〔2〕原材料和培养基的来源及质量是否稳定； 〔3〕生产工艺和条件。包括灭菌方法和条件，生产方式(连续、批 式、半连续)，生产周期，生产能力，工艺控制条件及方式等； 〔4〕初始物料的物理、化学和生物学特性。包括产物浓度、主要杂质 种类和浓度、盐的种类和浓度、溶解度、pH、粘度、流体力学性 质和热力学性质等。 谢谢欣赏 2021-5-18 一、建立分离纯化工艺需了解的各种因素 2. 物料中杂质种类和性质 物料中杂质种类和性质包括相关性和非相关性杂质的含量、 化学性质、结构、相对分子质量、电荷性质及数量、生物学特性、 稳定性(对热、pH、盐、有机溶剂等)、溶解度、分配系数、挥发性 及吸附性能等。 谢谢欣赏 2021-5-18 二、建立分离纯化工艺需了解的各种因素 3. 目的产物的特性 目的产物特性主要有产物的化学、物理和生物学特性。 包括化学组成、相对分子质量、等电点、电荷分布及密度、