第五章 体内药物分析.pptVIP

* 本法特点：少溶剂、少污染、减少液液萃取的乳化。适合各种液体检材如血、尿、洗胃液、现场水、饮料等，对于肝、肾、胃以及其他固体检材，均需制成水液方可进行固相萃取。 谢谢欣赏 2021-5-18 柱切换高效液相色谱技术是指由阀来改变流动相走向与流动相系统，从而使洗脱液在一特定时间内从预处理柱进入分析柱的技术。 用两个或两个以上柱子连接构成色谱网络系统，使不同柱子到达不同别离目标，柱子间用切换阀联结，这就是柱切换技术。 根本原理是首先在预柱上实现生物体液中干扰大分子与待测药物的别离，然后用柱切换将待测药物从预柱转移至分析柱上完成色谱分析。 自动化固相萃取-柱切换高效液相色谱法 * 谢谢欣赏 2021-5-18 * 谢谢欣赏 2021-5-18 3. 超滤法 膜别离技术，可用于测定生物样品中游离药物浓度 按照分子截留量的大小，可别离30?1000kD的可溶性生物大分子物质。可加压过滤或高速离心。 * 谢谢欣赏 2021-5-18 〔三〕、辍合物的水解： 酸水解法：强酸、加热 酶解：常用葡萄糖醛酸酶，一般控制pH4.5~5.5 ，37℃孵育数小时。 溶剂解： * 谢谢欣赏 2021-5-18 〔四〕、化学衍生化 1、使药物变成能被分析的性质 2、提高检测灵敏度 3、增强药物稳定性 4、提高对光学异构体别离的能力 气相色谱衍生化 液相色谱衍生化 * 谢谢欣赏 2021-5-18 衍生化方法：柱前衍生， 柱后衍生 气相色谱衍生化方法：硅烷化、酰化、烷基化、不对称衍生化 液相色谱衍生化方法：紫外衍生化、荧光衍生化、电化学衍生化、手性衍生化 * 谢谢欣赏 2021-5-18 第三节、体内样品分析方法与方法验证 一、分析方法的建立 〔一〕、分析方法的选择 1、色谱分析法 2、免疫分析法 3、生物学方法 * 谢谢欣赏 2021-5-18 常用分析方法的特点 分析方法 检测限度/10-8g/ml 特异性/分离能力 紫外分光光度法（UV） 100 － 荧光分光光度法（Fluor） 0.1 + 原子吸收光度法（AA） 0.1 + ? ? 气相色谱法（GC） ? ? 氢火焰离子化检测器（FID） 1～10 ++ 氮磷检测器（N-PD） 0.1～0.01 +++ 电子捕获检测器（ECD） 0.01 +++ 质谱检测（MS） 0.001 ++++ 高效液相色谱法（HPLC） ? ? 紫外检测器（UV） 10 ++ 荧光检测器（Fluor） 0.1 +++ 电化学检测器（ECD） 0.01～0.001 +++ 质谱检测 ? ?++++ 免疫法（RIA） 酶免疫法（EIA） 0.001 ++ 0.001 ++ 放射免疫 0.001 * 谢谢欣赏 2021-5-18 〔二〕、分析方法建立的一般程序 1、色谱条件的筛选：确定最正确分析检测条件；色谱柱(型号、牌号、填料性质、柱长度)；流动相组分及配比、流速、柱温、进样量、内标物质的浓度及其参加量等；使各物质具有足够的方法灵敏度(LOQ)；良好的色谱参数(n、R、T)和适当的保存时间(tR)。 * 谢谢欣赏 2021-5-18 2、色谱条件的优化： 在进行别离条件筛选时，应考察生物基质中的内源性物质及代谢产物对别离与检测的干扰，步骤如下： 空白溶剂试验 ——溶剂(方法特异性) 空白生物基质试验 —— 内源性物质干扰(方法特异性) 模拟生物样品试验 —— 方法验证〔效能指标〕 3、实际生物样品测试 * 谢谢欣赏 2021-5-18 二、分析方法的验证 1．特异性——防止干扰 2．标准曲线与线性范围 3．定量限——灵敏度 4．精密度与准确度——结果可重现 5．样品稳定性 6．提取回收率 7．分析过程的质量控制 体外药物分析 * 谢谢欣赏 2021-5-18 谢谢观赏 谢谢观赏 第五章 体内药物分析 * 谢谢欣赏 2021-5-18 生物样品特点 1、被测定的药物和代谢物的浓度低； 2、样品大多需要别离和净化； 3、样品量少，连续测定时，很难再度获得完全相同的样品。 4、工作量较大， 5、要求很快地提供结果(毒物检测) * 谢谢欣赏 2021-5-18 样品制备：去除蛋白质、缀合物水解、化学衍生化、别离浓集〔液液萃取、固相萃取等〕； 样品测定：光谱分析法、色谱分析法、免疫分析法、生物学方法 方法验证：特异性、标准曲线和定量范围、定量下限、精密度与准确度、稳定性、提取回收率 体内药物分析： * 谢谢欣赏 2021-5-18