RTPCR数据分析材料.docxVIP

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2021-10-25 发布于广东
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RTPCR数据分析材料.docx

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精选文档 . 用2-△△Ct法分析real-time PCR数据 -----联合应用LightCycler Data Analysis软件和MS Excel By netmee，引用请注明作者。. 1、翻开存取的数据文件，点击 2、依次点击，，这是合适SYBR green为染料的选项。.点击step1：Baseline下的“change graph settings〞小图标。.取消弹出的Customize Graph选项卡中的Logarithmis选项，点击“OK〞按钮，退出选项卡。. 3、点击下的“change graph settings〞小图标，取消弹出的Customize Graph选项卡中的Logarithmis选项，点击“OK〞按钮，退出选项卡。. 4、在选项卡中拖动红色标记线，选取个条曲线都为直线上升部位。. 5、可以在选项卡中观察是否需选取的是曲线直线上升局部。.观察绿线局部与S型曲线交叉的局部是否为直线。. 6、如果确为直线，则左侧的“Crossing Point〞值为所需要的Ct值。. 7、依次选取下列图菜单：将数据导出为文本文件。. 8、翻开所保存的文本文件，如图选取 9、将数据粘贴入新建的excel文件，“Crossing Point〞列即是Ct值，删除“Standard〞和“Calculated Concentration〞列。. 10、将目的基因，本例中为“iNOS〞的Ct值按标本对应剪切入beta-actin值右侧一列。.分别标记两列数据为“beta-actin〞和“iNOS〞。. 11、设置全部Ct值的单元格格式 12、数字选项卡，分类选择为数值，点击确定。. 13、将E列〔目的基因Ct值右侧一列〕输入公式“=D4-C4〞，求出目的基因与同管beta-actin Ct值之差，即△Ct。. 14、向下拉复制公式，将△Ct列数值计算出。. 15、在△Ct 列右侧一列插入公式“=POWER(2,(0-E4))〞，此即目的基因相对beta-actin的相对表达量，即2-△Ct〔2的-△Ct次方〕。. 16、在2-△Ct列右侧插入公式“=F4/$F$4〞，此列即“2-△△Ct〞列，复制公式填满全部标本对应的2-△△Ct空格。. 17、至此，2-△△Ct法计算的各标本目的基因的相对表达量完成，2-△△Ct列的数据可以用统计软件进行分析。. (精选文档，可编辑word，整理文档不易，建议收藏)(精选文档，可编辑word，整理文档不易，建议收藏)(精选文档，可编辑word，整理文档不易，建议收藏)(精选文档，可编辑word，整理文档不易，建议收藏)(精选文档，可编辑word，整理文档不易，建议收藏)(精选文档，可编辑word，整理文档不易，建议收藏)(精选文档，可编辑word，整理文档不易，建议收藏)(精选文档，可编辑word，整理文档不易，建议收藏)(精选文档，可编辑word，整理文档不易，建议收藏)(精选文档，可编辑word，整理文档不易，建议收藏)