第三章氨基酸.pptVIP

二、氨基酸的两性解离  氨基酸等电点的计算 * 反应特点 A.为α- NH2的反应 B.氨基酸α- NH2的一个H原子可被烃基取代(卤代烃) C.在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成二硝基苯氨基酸 * 应用：鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸 首先由Sanger应用，确定了胰岛素的一级结构 A.肽分子与DNFB反应，得DNP-肽 B.水解DNP-肽，得DNP-N端氨基酸及其他游离氨基酸 C.分离DNP-氨基酸 D.层析法定性DNP-氨基酸，得出N端氨基酸的种类、数目 肽链（N端氨基酸）与PITC偶联，生成PTC-肽 环化断裂：最靠近PTC基的肽键断裂，生成PTC-氨基酸和少 一残基的肽链，同时PTC-氨基酸环化生成PTH-氨基酸 分离PTH-氨基酸 层析法鉴定 Edman降解法的改进方法--- DNS-Edman降解法 用DNS(二甲基萘磺酰氯)测定N端氨基酸 原理DNFB法相同 但水解后的DNS-氨基酸不需分离，可直接用电泳或层析法鉴定 由于DNS有强烈荧光，灵敏度比DNFB法高100倍，比Edman法高几到十几倍 可用于微量氨基酸的定量 * * 第一节 蛋白质的组成单位-氨基酸 氨基酸的结构通式 H C COOH NH2 R 第三章 氨基酸 第二节 氨基酸的分类 1、按R基的极性不同来分类 非极性R基氨基酸 含脂肪烃R基：Met、Val、Ala Leu、Ile、 含芳香环及杂环R基：Phe、 Trp、Pro 极性R基氨基酸 不带电荷的极性R基：Ser、Thr、 Gly、 Asn、Gln、Tyr、Cys 带正电荷的极性R基：Lys、His、 Arg 带负电荷的极性R基：Asp、Glu 2、按R基的化学结构不同来分类 脂肪族氨基酸 含一氨基一羧基的 中性氨基酸： Gly、Ala、Val、Leu、Ile、 Cys、Met 含羟基的氨基酸： Ser、Thr、 含酰基的氨基酸： Asn、Gln 含一氨基二羧基的 酸性氨基酸： 含二氨基一羧基的 碱性氨基酸： Asp、Glu Lys、Arg 芳香族氨基酸： 杂环族氨基酸： Phe、Tyr、 Trp His、Pro 第三节 氨基酸的酸碱化学 一、氨基酸的兼性离子形式： 氨基酸或肽在晶体或水中以兼性离子形式存在，熔点高。 pH = pI 净电荷=0 pH pI 净电荷为正 pH pI 净电荷为负 CH R COOH NH3+ CH R COO NH2 CH R COO NH3+ + H+ + OH- + H+ + OH- (pK′1) (pK′2) pH = pI： 蛋白质处于中性环境，两边解离趋势相等而成兼性离子 pH ＞ pI：蛋白质处于碱性环境，羧基解离趋势大于氨基而成负离子 pH＜ pI： 蛋白质处于酸性环境，氨基解离趋势大于羧基而成正离子 三、氨基酸的两性解离性质及等电点  当氨基酸溶液在某一定pH值时，使某特定氨基酸分子上所带正负电荷相等，成为两性离子，在电场中既不向阳极也不向阴极移动，此时溶液的pH值即为该氨基酸的等电点(isoelectric point，pI)。 *在氨基酸等电点以上任何pH，AA带净的负电荷，在电场中向阳极移动；在氨基酸等电点以下任何pH，AA带净的正电荷，在电场中向阴极移动。 *在一定pH范围中，溶液的pH离AA等电点愈远，AA带净电荷愈多。 可见，氨基酸的pI值等于该氨基酸的两性离子状态两侧的基团pK′值之和的二分之一。 pI= 2 pK1+pK2 一氨基一羧基AA的等电点计算： pI= 2 pK2+pKRNH2 二氨基一羧基AA的等电点计算： pI= 2 pK1+pKRCOOH 一氨基二羧基AA的等电点计算： Calculation of pI (1) Calculation of pI (2) Calculation of pI (3) pk3 例题与习题: 现在有四个氨基酸：苯丙氨酸pI=5.5、脯氨酸pI=6.3、门冬氨酸pI=2.8和赖氨酸pI=9.7，请问在以下pH条件下进行电泳，各氨基酸的主要存在形式是什么？在外电场作用下，移向阳极还是阴极？ 苯丙氨酸 脯氨酸 门冬氨酸 赖氨酸 （1）pH=7.0 （2）