枯草芽孢杆菌.pdfVIP

芽孢杆菌属的一种。单个细胞～× 2～ 3 微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革 兰氏阳性菌， 芽孢～×～微米， 椭圆到柱状， 位于菌体中央或稍偏， 芽孢形成后菌体不膨大。 菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，在液体培养基中生长时，常形成皱醭。需氧菌。可 利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。有的菌株是 α- 淀粉酶和中性蛋白酶的 重要生产菌；有的菌株具有强烈降解核苷酸的酶系，故常作选育核苷生产菌的亲株或制取 5- 核苷酸酶的菌种。在遗传学研究中应用广泛，对此菌的嘌呤核苷酸的合成途径与其调节 机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故名。 常用培养基配方： 1L 蒸馏水 +10g 蛋白胨 +3g 牛肉膏 +15-20g 琼脂 能耐氧化；耐挤压；耐在快速繁殖过程中，产生大量多种维生素、有机酸、氨基酸、蛋白酶 （特别是碱性蛋白酶） 、糖化酶、脂肪酶、淀粉酶，高温，能长期耐 60°C 高温，在 120°C 温度下能存活 20 分钟 芽孢染色法 是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色， 使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，因此， 当先用一弱碱性染料，如孔雀绿（ malachite green ）或碱性品红（ basicfuchsin ）在加热 条件下进行染色时， 此染料不仅可以进入菌体， 而且也可以进入芽孢， 进入菌体的染料可经 水洗脱色，而进入芽孢的染料则难以透出，若再用复染液（如番红液）或衬托溶液（如黑色 素溶液）处理，则菌体和芽孢易于区分。 （1） 将培养 24 小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌，作涂片、干燥、固定。 （2 ） （3 ） （2 ）滴加 3— 5 滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。 （4 ） （5 ） （3 ）用木夹夹住载玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸 干，必要时可添加少许染液。 加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约 4—5 分钟。 这一 步也可不加热，改用饱和的孔雀绿水溶液（约 7 ．6 ％）染 10 分钟。 （6 ） （7 ） （4 ）倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。 （8 ） （9 ） （5 ）用番红水溶液复染 1 分钟，水洗。 （10 ） （11 ） （6 ）待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。 】 在 pH 为 ~时生长良好，最适生长温度为 370 一、目的要求 1、学习分离、纯化噬菌体的基本原理和方法。 2、学习噬菌体效价测定的基本方法。 二、基本原理 因为噬菌体是专性寄生物， 所以自然界中凡有细菌分布的地方， 均可发现奇特异的噬菌体的 存在，亦即噬菌体是伴随着宿主细菌的分布而分布的， 例如粪便与阴沟污水中含有大量大肠 杆菌， 故也能很容易的分离到大肠杆菌噬菌体； 乳牛场有较多的乳酸杆菌， 也容易分离到乳 酸杆菌噬菌体等。 由于噬菌体侵入细菌细胞后进行复制而导致细胞裂解， 噬菌体即从中释放 出来，所以， （a）在液体培养基内可使混浊菌悬液变为澄清，此现象可指示有噬菌体存在； 也可利用这一特性， 在样品中加入敏感菌株与液体培养基， 进行培养， 使噬菌体增殖、 释放， 从而可分离到特异的噬菌体；（ b ）在宿主细菌生长的固体琼脂平板上，噬菌体可裂解细菌 而形成透明的空斑，称噬菌体斑（图 1），一个噬菌体产生一个噬菌斑，利用这一现象可将 分离到的噬菌体进行纯化与测定噬菌体的效价。 本实验是从阴沟污水中分离大肠杆菌噬菌体， 刚分离出的噬菌体常不纯，