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（二）流动相的强度和选择性 溶剂的极性（强度） 正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 溶剂的选择性 不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故选择性不同 混合溶剂（二元或多元流动相） 第三十一页，共51页 三、分离条件的选择 （一）HPLC中的速率理论 涡流扩散　A=2λdp 球形、小粒度、均匀（RSD＜5%）固定相，匀浆高压填充，以降低A。 纵向扩散　β=2γDm 可以忽略。 因为Dl很小，室温操作，且U大于U最佳， 第三十二页，共51页 HPLC中的速率理论 传质阻抗 固定相传质阻抗CS可以忽略 ，因df极小 流动相传质阻抗Cm 要求： dp小，Dm大 第三十三页，共51页 静态流动相传质阻抗 ： 由于部分流动相在固定相微孔内的滞留 静态流动相传质阻抗系数Csm Csm ∝dp2， Csm ∝1/Dm，而Dm∝T/η 要求: 固定相dp2、 流动相η都小 HPLC中的速率理论 第三十四页，共51页 H =A + Cmu + Csmu 原因：化学键合相，液体流动相 结果：HPLC的实验条件应该是：①小粒度、均匀的球形化学键合相；②低粘度流动相，流速不宜过快；③柱温适当。 HPLC中的速率理论 第三十五页，共51页 （二）正相键合相色谱法的分离条件 固定相 极性键合相　如氰基、氨基键合相等 流动相 烷烃加适量极性调节剂 第三十六页，共51页 仪器分析 第十八章 高效液相色谱法 分析化学高效液相色谱法 第一页，共51页 经典液相色谱法为基础， 引入气相色谱法的理论和实验技术， 高压输送流动相， 高效固定相及高灵敏度检测器， 现代液相色谱分析方法。 第二页，共51页 与经典液相色谱法相比  颗粒极细（一般为10?m以下）、规则均匀的固定相，(键合相)传质阻抗小，柱效高，分离效率高； 高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度快； 高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。紫外检测器最小检测限可达10?9g，而荧光检测器最小检测限可达10?12g。 第三页，共51页 与气相色谱法相比 不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广； 可选用各种溶剂作为流动相，对分离的选择性有很大作用，选择性高； 一般在室温条件下进行分离，不需要高柱温。 第四页，共51页 第一节 高效液相色谱法的主要类型 和原理 一、主要类型 四类基本类型色谱法 分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC） 第五页，共51页 第一节 高效液相色谱法的主要类型和原理 一、主要类型 四类基本类型色谱法 分配色谱法（partition chromatography） 吸附色谱法（adsorption chromatography） 离子交换色谱法（IEC） 空间排阻色谱法（SEC） 化学键合相色谱法 第六页，共51页 其他色谱类型 亲合色谱法（affinity chromatography；AC） 手性色谱法（chiral chromatography；CC） 胶束色谱法（micellar chromatography；MC） 电色谱法（electrochromatography；EC） 第七页，共51页 二、化学键合相色谱法 以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法(bonded phase chromatography；BPC) 化学键合相：采用化学反应的方法将官能团键合在载体表面所形成的固定相 第八页，共51页 优点： 固定相的均一性和稳定性好，在使用过程中不易流失，使用周期长； 柱效高；重现性好； 能使用的流动相和键合相的种类多，分离的选择性高 正相（normal phase，NP）和反相（reversed phase，RP）键合相色谱法： 根据化学键合相与流动相极性的相对强弱 第九页，共51页 （一）正相键合相色谱法 固定相：极性键合相 如氰基（－CN）、氨基（－NH2）或二羟基键合硅胶。（经典：水饱和的硅胶） 流动相：非极性或弱极性溶剂加极性调整剂 如烷烃加醇类。（与水不混溶的溶剂） 适用范围：溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物 如一些在硅胶柱上分离的物质 第十页，共51页 正相键合相色谱法 分离机制？ 分配：把有机键合层作为一个液膜看待，溶质在两相的溶解 吸附：溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作用 分离选择性：极性强的组分k大，后洗脱出柱。流动相的极性增强，洗脱能力增加，使组分k减小，tR 减小。 第十一页