细胞冻存与复苏技术.pdfVIP

如果对你有帮助，请下载使用！ 细胞冻存与复苏技术 概述 细胞培养技术自 1907 年开创以来，历经一个世纪现已成为自然科学领域不 可缺少的研究方法之一。 在细胞培养技术广泛用于科学研究领域的令天， 细胞株 的冷冻保存和解冻复苏这一基础技术日益得到重视。 低温保存是活体组织保存最常用的方法之一。冷冻保存一般是指在 0— 196 o C 进行保存， 就是将体外培养物悬浮在加有或不加冷冻保护剂的溶液中， 以一定的 冷冻速率降至零下某一温度，并在此温度下对其长期保存的过程。主要有 -20~- 40℃ 冰箱保存、 -60~- 80℃深低温冰箱和液氮 ( 一 196℃) 超低温保存等。 应用方向 1. 医学方面 近年来干细胞的研究越来越被人们关注， 由于它是一种具有自我复制能力的 多潜能细胞，在一定条件下，可分化为多种功能细胞。 根据发育阶段和取材来源， 干细胞分为胚胎干细胞和成体干细胞两大类。 骨 髓和脐血是成体干细胞的主要来源。 骨髓干细胞在骨髓中含量极少， 约占骨髓有核细胞的十万分之一， 所以要在 临床上广泛应用首先必须具备先进的冻存与复苏技术。 而干细胞研究的深入将解决包括癌症等一系列为人们所知的“绝症”。而“冬 眠”技术对医学的发展有着里程碑式的意义。 2. 生物学方面 细胞冻存技术是生物学保存物种的重要手段。 在环境遭到史无前例的破坏动 物、植被随时可能面临灭绝危险的今天，更是尤为关键，虽然不是治本的方法， 但至少可以尽可能的留下那些曾经存在的生命痕迹。 发展历史 1. 1776 年． Spallanzani 最早发表了“冷”处理对“细胞”生命活动影响的报 道。 2. 十九世纪中后叶， 许多早期的工作者 (Prevost ，1840；de Quatrefages ，1853； Mantegazza，1866；Scheuk，1870) 重复研究了低温处理对精子活动的影响，得 出了和 Spallanzani 相似的结论。即“冷不能杀死精子”。 3. 1900 年前后，科学家基本上肯定了生物成份能够在零下温度储存的事实。 4. 二十世纪 50 年代 Luyet 等多位学者发现了电解质浓度对储存细胞的损伤作 用，他们的基本结论是。电解质浓度增大是造成储存细胞损伤的主要原因。 5. 1972 年．Mazur 等首先根据中国仓鼠组织培养细胞的低温保存实验数据分析， 提出关于冷冻损伤的两因素假说目，即冰晶损伤和溶液损伤假说。 这个假说认为随着温度的下降， 细胞内外的水分结冰， 所形成的冰晶会造成 细胞膜和细胞器的破坏并引起细胞死亡。 这种因细胞内部结冰而致的细胞损伤即 就是冰晶损伤 (Intracellular ice damage) 。冰晶损伤是由冷却速度过快造成， 冷却速度越快，冰晶损伤越大。 同时随着温度的下降． 细胞外部的水分会先结冰， 从而使得未结冰的溶液中 电解质浓度升高，细胞膜上的脂质会因长时问暴露在高溶质的溶液中而受到损 1 如果对你有帮助，请下载使用！ 坏，细胞发生渗漏， 导致在复温时大量水分渗入细胞内造成细胞死亡。 这种因保 存溶液溶质浓度增高而致的细胞损伤被称为溶液损伤