氯氨酮对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡和Fas蛋白Bcl.docVIP

氯氨酮对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡和Fas蛋白Bcl 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：氯氨酮对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡和Fas蛋白Bcl 1 1 材料与方法 2 2 结果 3 3 讨论 4 文2：当归注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤后CDK2蛋白的表达 5 1 材料与方法 6 2 结果 8 3 讨论 9 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 13 正文 氯氨酮对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡和Fas蛋白Bcl 文1：氯氨酮对大鼠心肌缺血再灌注心肌细胞凋亡和Fas蛋白Bcl 细胞凋亡不同于细胞坏死的另一种细胞死亡形式, 它是一个受遗传基因调节的生理学细胞自杀过程或程序性细胞死亡［1］ 。研究表明在心肌缺血再灌注过程时，大量氧自由基生成、细胞内钙超载、大量中性粒细胞浸润以及线粒体损伤等均可促进心肌细胞凋亡，造成心肌损伤。而细胞凋亡中,凋亡刺激基因的蛋白表达产物Fas 蛋白及抗凋亡因子Bcl2蛋白的作用被认为中有重要意义。有研究表明氯胺酮可抑制心肌缺血再灌注损伤，但对其是否抑制心肌中的细胞凋亡并不清楚。本实验研究氯胺酮对其作用下大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡与Fas 及Bcl2 蛋白表达量的变化及与心肌组织损伤的关系。 1 材料与方法 11 实验材料与仪器小型动物呼吸机(浙江大学实验仪器厂 ),心电图检测仪(浙江大学实验仪器厂)。细胞凋亡原位检测试剂盒( In Situ Cell Death Detection Kit , POD)购自Boehringer Mannheim公司,兔抗鼠Fas 多克隆抗体及FasL 多克隆抗体均购自Santa Cruz 公司。SABC试剂盒购自于博士德公司。 12 实验动物及分组雄性健康SD大鼠（6个月左右）32只，由长江大学医学院实验动物中心提供,体重250~300g, 随机分为4组，每组8只。A组为假手术对照组；B组为缺血再灌注模型对照组；C组为2mg/kg氯胺酮+缺血再灌注模型组;D组为4mg/kg氯胺酮+缺血再灌注组。 13 动物模型制备10%水合氯醛40mg/kg腹腔注射麻醉，连接多功能监护仪记录Ⅱ导心电图；气管切开，接小型动物呼吸机进行机械通气，呼吸频率60次/分，潮气量2ml/100g，于左胸第四肋间打开胸腔暴露心脏，在左心耳1mm左冠状动脉处，用眼科外用不锈小圆针穿过心肌浅层，稳定10min后将U型含有铜丝的胶管置于冠状动脉表面一起结扎（A组不结扎，B、C、D组结扎）；结扎开始左心室心尖部即由红色变暗，30min后呈暗红色，心电图中出现ST段抬高，说明缺血形成。此时B、C、D组分别由右腹股静脉注入10mL/kg生理盐水、2mg/kg氯胺酮、4mg/kg氯胺酮,解开结扎线后进行再灌注。在再灌注4h后断头处死，将新鲜心肌组织标本放入40 g/L中性甲醛溶液中固定, 然后集中进行石蜡包埋, 切片于4℃冰箱保存备用。 14 凋亡细胞原位标记与半定量分析石蜡包埋的心肌组织,采用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT 酶) 介导的带荧光的dU TP 缺口末端标记法检测。结果根据凋亡阳性细胞分布情况, 每张切片拍摄5个阳性视野, 每视野记数300 个心肌细胞中阳性细胞数, 以平均 计算 阳性细胞所占的百分比作为凋亡细胞阳性指数(AI) 15 Fas基因和Bcl2基因蛋白表达检测与半定量分析取上述石蜡标本相应部位的连续切片各5 张，采用链霉亲和素生物素过氧化酶复合物技术(SABC) 法进行免疫组化染色和HRP/ AEC 显色法。每张切片于阳性表达区域选择10 个无重叠视野,用图像分析仪进行分析,并计算其光密度值的均值。采用光密度值的均值×102 表示。 16 心肌组织病理学分析切片于HE 染色后观察其组织病理性损伤改变。 17 统计学处理采用SPSS软件进行统计学分析,多组间比较用单因素方差分析，q检验进行组间比较，P为差异有显著性。 2 结果 21 心肌凋亡细胞计数心肌组织中凋亡细胞的分布及变化: 经TUNEL 染色及苏木素复染后凋亡细胞核呈棕色,正常细胞核染蓝色。假手术组仅见极少数散在的凋亡细胞; 心肌缺血再灌注后凋亡细胞数明显增加, 氯氨酮作用后凋亡细胞数明显下降,且低剂量氯氨酮作用组下降更多。见表1。 22 心肌组织中Fas 和Bcl2基因的蛋白阳性染色变化假手术组仅见极少数散在的Fas 蛋白阳性染色细胞和 Bcl2蛋白阳性染色细胞;心肌缺血再灌注后Fas 和Bcl2蛋白阳性染色的细胞增加,Fas和Bcl2蛋白阳性细胞多为位于心肌梗死区周围的心肌细胞,氯氨酮作用后Fas蛋白和Bcl2蛋白阳性细胞数较缺血再灌注组减少,低剂量组减少更多。见表2。 表1 各