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悦肝胶囊对体外培养肝细胞抗衰老作用的研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：悦肝胶囊对体外培养肝细胞抗衰老作用的研究 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 5 文2：葡多酚对体外培养肝细胞PKC表达影响 6 1 材料与方法 6 11 材料 6 12 实验方法 7 2 结果 8 3 讨论 9 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 悦肝胶囊对体外培养肝细胞抗衰老作用的研究 文1：悦肝胶囊对体外培养肝细胞抗衰老作用的研究 Abstract：ObjectiveTo observe the antiaging effects of Yuegan capsule. Methods Hepatocytes injury models were induced by Dgalactose in rats in vitro, and treated with Yuegan capsule. Structure, cytochemistry of rat hepatocytes and effect of SOD, MDA activities were observed. Results Yuegan Capsule decreased the content of MDA and increased SOD activity. According to the observation of histochemistry and ultrastructure, it showed that SDH activity decreased, ACP activity increased, the mitochondrion swelled and became deformed, crest broke. Yuegan capsule alleviated denatured degree above. Conclusion The Yuegan Capsule has protective effects on Dgalactoseinduced injury of primary cultured rat hepatocytes. Key words：Yuegan Capsule； Aging； Rat hepatocytes 悦肝胶囊主要由葛根、丹参、西洋参、麦冬等4味中药水提物按适当比例配制而成的复方中成药。此药对体外培养肝细胞四氯化碳损伤具有良好的保护作用。为探讨悦肝胶囊是否具有抗衰老作用，本实验观察了悦肝胶囊对D半乳糖所致衰老大鼠肝细胞氧自由基相关指标的影响，以及肝细胞超微结构、组织化学的改变，为寻找有效的抗衰老药物提供理论和实验依据。 1 材料与方法 动物 Wistar系大鼠乳鼠，鼠龄1~5 d，由延边大学医学院实验动物科提供。 药物与试剂悦肝胶囊由延边大学长白山天然药物研究中心提供。制备方法：葛根30 g，丹参30 g，麦冬20 g，西洋参20 g，加蒸馏水煮1 h后过滤，滤出液备用，把原药再煮1 h后过滤，把第1次滤出液和第2次滤出液混合，浓缩成100 ml即得。D半乳糖为上海试剂二厂产品。（批号为980218）人参皂苷为吉林省白山市靖宇县黄封参药业公司产品，用RPMI1640培养液配成300 μg/ml浓度用于实验 ，新生小牛血清为杭州四季青生物工程公司产品，RPMI1640培养基为日本株式会社产品，胰蛋白酶为美国DIFCO公司产品，胶原酶为美国SIGMA化学公司产品。SOD、MDA试剂盒为南京建成生物工程研究所产品，其他试剂均为国产分析纯。 仪器 超净工作台为北京昌平长城净化设备厂产品，日本PC23232E型二氧化碳恒温培养箱，日本OLYMPUS倒置显微镜， 日本JEM1200EX型透射电镜,日本OLYMPUS万能显微镜,芬兰MK3酶标仪,德国ZK15超低温高速离心机,北京天地百年科技有限公司TD2000真彩色病理细胞显微分析系统。 方法取日龄1~5 d的Wistar系大鼠乳鼠，无菌条件下取肝脏，磷酸缓冲液中去浆膜，切成小块，放入 g/L胶原酶和 g/L胰蛋白酶等量混合液内冷消化，经离心制成细胞悬液，接种于含有200 g/L小牛血清的RPMI1640培养基内，原代单层培养3~4 d，取生长良好的培养瓶40瓶分为4组。正常对照组每隔3 d更换培养基；模型对照组加入8 g/L D半乳糖 ；药物对照组加入8 g/L D半乳糖+300μg/ml人参皂苷；实验组加入8 g/L D半乳糖+500 μg/ml 悦肝胶囊。作用24 h后，模型对照组换接种培养基；药物对