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广佛手rDNAITS序列测定及特点的初步分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：广佛手rDNAITS序列测定及特点的初步分析 1 1 材料和方法 3 2 结果 4 3 讨论 5 文2：广佛手rDNAITS序列测定及特点的初步分析 6 1 材料和方法 7 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 广佛手rDNAITS序列测定及特点的初步分析 文1：广佛手rDNAITS序列测定及特点的初步分析 Abstract:ObjectiveThe ribosomal DNA internao tracribed space(ITS)and rDNA ITS sequence of Citrus medica (Nootc).Swingle and . were rDNA ITS gene fragment was amplified by PCR with univeal prime of rDNA ITS and DNA sequence of ITS ranged from 644 bp to 672 bp and the gene of all of the samples was 165 bp in values of ITS1 and ITS2 sequence,estimated according to Kimura two-parameter models between Citrus (Noot.)Swingle and its adulterant and L.,were and , ITS sequence may be the evidence for the molecular authentication of Citrus medica (Noot.)Swingle. Key words:Citrus medica (Noot.) Swingle; L.; rDNA internal tracribed space sequence DNA 分子标记技术进入到中药材鉴定和品质评价等研究领域，提供了大量的潜在特征，在中药材近缘属间，属内以及种内居群间的差异性研究［1］中得到了广泛应用。作为18S～26S rDNA 组成部分，rDNA 中的内转录间隔区（internal tracribed spacer ,ITS）序列是中度保守的重复序列，在被子植物较低的分类阶元上具长度保守性和核苷酸序列的高度变异性［2］，这使得这些间隔区的序列可以用rDNA基因的通用引物实现快速扩增、容易排序，而高度变异性可以提供丰富的变异位点和信息位点，在许多被子植物发育和进化研究中已证明是十分有用的分子标记［3～5］。佛手是芸香科柑橘属植物Citrus medica (Noot.) Swingle成熟果实［6］。其性味辛、苦、酸、温，具有理气健胃、镇呕祛痰之功， 治疗 胸腹胀满、消化不良、咳嗽、痞满等症，为我国传统中药。佛手醇提物对大鼠、兔离体肠管有明显解痉作用；能显著增加豚鼠离体心脏的冠脉流量和提高小鼠的耐缺氧能力［7］。广佛手主产于广东德庆、高要、云浮、郁南、化州等地，栽培 历史 悠久，为广东地道药材“十大广药”。在商品流通领域同属植物香橼 L.［8］也混作佛手使用，其品质呈现较大差异。为充分利用佛手这一地道药材资源，更好地控制其质量，本文测定了广佛手及其近缘种香橼的rDNA ITS序列。通过探讨上述品种间的DNA序列变异关系及其规律，为佛手基原植物的准确鉴定提供分子依据。 1 材料和方法 材料来自广州市的新鲜植物材料由广州省中药研究所华南中药种质资源库提供；来自广东化州地区的新鲜植物材料由本文第三作者采集，并由广东药学院中药鉴定教研室鉴定。见表1。 表1 广佛手和香橼rDNA ITS序列特征及在EMBL的注册登记号（略） 试剂CTAB（gene）,ExTag DNA聚合酶（Mg2+，15 mmol/L）（TaKaRa），琼脂糖（Promega）,PCR产物纯化试剂盒（QIAGEN），10 mM dNTP(Sangon) 主要仪器台式高速离心机（Sigma），涡旋混合仪（IKA WORKS），PE480 PCR扩增仪（PE），恒压恒流电泳仪（Life Technologies ），凝胶成像仪（Kodak EDAS120），全自动测序仪（Perkin Elmer377） 总DNA的提取和纯化新鲜植物叶片，参照Rodrigues组织培养表面消毒的［9］方法处理后各 g，加液氮研磨成细粉后，使用改良的CTAB法提取总DNA［10］，于-20℃保存备用。 目的基因片断的PCR扩增、产物纯化和测