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结核杆菌PEPCK免疫作用的初步研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：结核杆菌PEPCK免疫作用的初步研究 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 5 文2：红树莓抗肿瘤作用的初步研究 6 1 材料和方法 7 2 结果 8 3 讨论 9 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 结核杆菌PEPCK免疫作用的初步研究 文1：结核杆菌PEPCK免疫作用的初步研究 【Abstract】 Objective To research the immune effect of phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK) of mycobacterium Mice were infected with wild type BCG and pckA mutated BCG respectively. The lung histology of infected mice was number of CD4+ and CD8+ T cells，CD4+/CD8+ were assayed by flow 12 was detected by ELISA. BCG from splee of two groups of mice was cultured and the number of CFU was taken Granulomas in pckA mutated BCG (BCG△pckA) infected mice were fewer and more atypical than those in mice infected with wild type (BCGWT). The number of CD4+ T cells and the ratio of CD4+/CD8+ from the BCGWT group were significantly higher than those form BCG△pckA group. The titer of interleukin12 of BCGWT infected mice was higher that that of BCG△pckA group. And the number of BCG CFU from BCGWT group was more than that of BCG△pckA pckA gene is necessary for the growth of mycobacterium tuberculosis. PEPCK can effectively induce immune respoes and can be a good candidate for vaccine. 【Key words】 mycobacterium tuberculosis, pckA gene, phosphoenolpyruvate carboxykinase, immune protection 结核病是由结核杆菌感染所致的慢性传染病。世界上约有1/3的人感染结核［1］。现在使用的预防结核的卡介苗，保护作用从0%～80%不等，很不稳定。另外，现在由于药物的应用，多种药物抗性结核分枝杆菌已产生。所以寻找既可作为抗结核的疫苗，又可作为抗结核药靶的候选分子是当今研究的热点。基因组分析发现，结核杆菌含有pckA基因，其编码72 kD的磷酸烯醇型丙酮酸羧基酶（phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK），催化草酰乙酸和磷酸烯醇型丙酮酸之间的可逆性反应。PEPCK在结核致病和诱导机体免疫中可能起重要作用。本研究用敲除pckA基因的牛结核菌BCG感染小鼠，观察引起肺的病理变化和对淋巴细胞、细胞因子产生的影响，并检测了BCG在体内的生长情况；初步研究了结核杆菌pckA基因编码的PEPCK对结核杆菌生长的重要性及其免疫保护作用，为进一步研究提供了依据。 1 材料与方法 主要试剂及仪器 RPMI 1640培养液购于SCIENCE生物公司，HE和耐酸染剂购于上海市试剂工贸有限公司。检测细胞因子的单抗为美国BD PMG公司产品，碱性磷酸酶标记的兔抗大鼠IgG结合物为美国Sigma公司产品。异硫氰酸荧光素（FITC）标记的小鼠IgG2a、藻红蛋白（PE）标记的IgG2a及两者的同型对照为美国BD公司产品。FC500型流式细胞仪购于美国BECKMANCOULTER 公司，旋转薄片切片机为上海申安医药器械公司产品。 菌株 野生型牛结核杆菌（BCG