成纤维细胞生长因子10mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达医学.docVIP

成纤维细胞生长因子10mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：成纤维细胞生长因子10mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达医学 1 1对象和方法 2 文2：成纤维细胞生长因子在早期人胚胎组织的表达 6 1 材料和方法 6 2 结果 7 3 讨论 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 成纤维细胞生长因子10mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达医学 文1：成纤维细胞生长因子10mRNA在寻常型银屑病皮损中的表达医学 0引言 银屑病组织病 理学 的特征性表现为角质形成细胞异常增殖、真皮浅层淋巴细胞浸润、真皮乳头毛细血管迂曲扩张. 研究表明，在一些生长因子的作用下，角质形成细胞可表现为异常增殖和分化异常，如表皮生长因子、转化生长因子α和成纤维细胞生长因子等，其中成纤维细胞生长因子10（Fibroblast growth factor 10, FGF10）对角质形成细胞的异常增殖和分化异常可能有着重要的调节作用［1］. 近年来，通过基因打靶技术揭示了FGF10 特异性受体就是Bek［2-3］,但尚不清楚FGF10及其受体是否参与了银屑病的发病过程. 我们旨在通过检测FGF10 mRNA在正常皮肤和银屑病皮损中的表达,以进一步探讨FGF10在银屑病发病机制中的可能作用. 1对象和方法 对象选取我科门诊或者住院患者中临床皮疹典型并经病理证实的寻常型进行期银屑病皮损22例为实验组，同时取距该皮损约1 cm处非皮损区皮肤组织22例，其中男9例，年龄21~48（±）岁；女13例，年龄17~44 (±) 岁. 病史1 mon~33 a. 以上病例均在1 mo内未接受系统和局部的药物 治疗 ,无其他皮肤病及系统性疾病. 取材部位为躯干及下肢的皮损区. 另取22例在我院同期美容手术切除的正常皮肤作为对照组. 两组间性别、年龄等比较, 差异无显著性意义（P）,具有可比性. 方法 原位杂交定位原位杂交试剂盒购自武汉博士得生物公司. 所有标本均经40 g/L多聚甲醛固定,载、盖玻片均采用多聚赖氨酸处理. 为防止RNA 酶对mRNA 的降解作用,试剂的配制均使用焦磷酸二乙酯( sodium acid pyrophophate, DEPC). 简要步骤:活检组织固定包埋,切片脱蜡水化后用3 mL/L双氧水孵育10 min, DEPC水洗6 min ,胃蛋白酶K 消化30 min ,以去除阻碍探针结合的表面蛋白,PBS 和DEPC各水洗6 min ;每片加预杂交液20 μL, 42 ℃孵育2 h, pmol/L寡核苷酸探针(探针序列：3′端地高辛标记，合成5OD, 5′ TTC TAC TGA TGT TAT CTC CAG GAT GCT GTA3′), 42℃杂交22 h,2 ×SSC 和1×SSC 液各洗15 min ,羊血清封闭液37℃孵育30 min ,生物素化抗地高辛抗体37℃孵育1 h ,辣根过氧化物酶标记的链霉素复合物37 ℃孵育30 min ,二氨基联苯胺染色,核固红复染. 阴性对照用PBS代替杂交液;替代对照用无探针杂交液代替杂交液;阳性对照为已知阳性切片. 原位杂交切片结果的判定标准以有无蓝紫色颗粒沉着判定阳阴性. 细胞质不着色、阳性细胞数5%为阴性（-）；细胞质着色、阳性细胞数在5%～25%之间为阳性（+）；细胞质着色、阳性细胞数在26%～75%之间为强阳性（2+）；细胞质着色、阳性细胞数76%为极强阳性（3+） 原位杂交切片的Garcia半定量法判定标准在400倍光镜下进行 FGF10 mRNA定量,通过随机选择10个视野计数， 计算 每视野表皮中100个有核细胞中的阳性细胞数，取平均数为计量指标，用x±s表示. 统计学处理：计量资料用t检验，记数资料用χ2检验. 2结果 mRNA在正常皮肤及银屑病皮肤中的表达在寻常型银屑病皮损中FGF10 mRNA阳性蓝紫色颗粒主要表达于其表皮的全层或中下层,以中下层表达较明显，角质层不表达，定位于细胞质、细胞核内；在真皮的淋巴细胞、成纤维细胞质中也可见表达，在汗腺腺上皮细胞的胞质内呈强阳性表达(图1). 寻常型银屑病非皮损表皮内，FGF10 mRNA阳性蓝紫色颗粒主要表达于表皮的中下层或个别细胞的细胞质、细胞核内(图2A). 在正常皮肤中，FGF10 mRNA阳性蓝紫色颗粒主要表达于表皮的基底层或微量细胞质内(图2B) A： 皮损；B： 真皮淋巴细胞、成纤维细胞. 图1FGF10mRNA在寻常型银屑病皮肤中的表达ISH ×400（略） 图2FGF10mRNA在寻常型银屑病非皮损中(A)和在正常皮肤中(B)的表达 ISH A×100