人的幽门螺杆菌igghpigg酶联免疫分析elisa.docxVIP

人的幽门螺杆菌IgG （HP IgG ）酶联免疫分析（ELISA ） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关 液体样本中幽门螺杆菌IgG（HP IgG含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人的幽门螺杆菌 IgG（ HP IgG）水平。用纯化的 抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入幽门螺杆菌 IgG（HP IgG），再 与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显 色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅 和样品中的幽门螺杆菌 IgG（HP IgG）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人的幽门螺杆菌 IgG（ HP IgG）浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存 \ 说明书 1份 1份 圭寸板膜 2 片( 48) 2 片(96) 密封袋 1个 1个 酶标包被板 1 X 48 1 X 96 2-8 C保存 标准品：90n g/L X 1瓶 X 1瓶 2-8 C保存 标准品稀释液 X 1瓶 X 1瓶 2-8 C保存 酶标试剂 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 样品稀释液 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 显色剂A液 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 显色剂\ B液 3 ml X 1 瓶 6 ml X 1 瓶 2-8 C保存 终止液 \、 3ml X 1 瓶 6ml X 1 瓶 2-8 C保存 浓缩洗涤液 (20ml X 20 倍)X 1 瓶 (20ml X 30 倍)X 1 瓶 2-8 C保存 样本处理及要求： 1?血清：室温血液自然凝固 10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2?血浆：应根据标本的要求选择 EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂， 混合10-20分钟后， 离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再 次离心。 3?尿液：用无菌管收集，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中 如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4?细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时， 用PBS （）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100 万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。 离心20分钟左右（2000-3000 转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS,。用液氮迅速冷冻保存备用。标 本融化后仍然保持 2-8 C的温度。加入一定量的 PBS （）,用手工或匀浆器将标本匀浆充 分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻 备用。 操作步骤 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100 M，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50 d，混匀；然后从第一孔、第二 孔中各取100 d分别加到第三孔和第四孔， 再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50 d, 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50 d弃掉，再各取50 d分别加到第五、第六孔 中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各 取50 d分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50 d，混 匀后从第七、第八孔中分别取 50 d加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准 品稀释液50 d，混匀后从第九第十孔中各取 50 d弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50 d, 浓度分别为 60 ng/L,40 ng/L ,20 ng/L,10 ng/L,5））g/L 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40 d,然后再加待测样品10 d （样 品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混 匀。 温育：用封板膜封板后置 37 C温育30分钟。 配液：将30 （48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 （48T的20倍）倍稀释后备用。 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 加酶：每孔加入酶标试剂 50 d，空白孔除外。 温育：操作同3。 洗涤