自体树突细胞疫苗联合干扰素治疗慢性乙型肝炎的临床研究.docVIP

自体树突细胞疫苗联合干扰素治疗慢性乙型肝炎的临床研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：自体树突细胞疫苗联合干扰素治疗慢性乙型肝炎的临床研究 1 1 资料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 5 文2：干扰素联合病毒唑治疗慢性丙型肝炎临床观察 6 1 资料与方法 7 2 结果 8 3 讨论 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 自体树突细胞疫苗联合干扰素治疗慢性乙型肝炎的临床研究 文1：自体树突细胞疫苗联合干扰素治疗慢性乙型肝炎的临床研究 树突状细胞（dendritic cell,DC)是起源于骨髓的专职抗原提呈细胞（antigen pressenting cell,APC)，具有启动T细胞介导的免疫应答功能，最早由Steinman和Cohn首次于1973年发现，因其细胞形态上具有众多树突状突起而得名。目前已发现了许多疾病的发生与转归都与DC有关。随着对DC的体外分离、扩增和培养技术等基础研究的不断成熟，DC疫苗在肿瘤、自身免疫性疾病和慢性肝炎的治疗中引起人们的广泛关注。本研究将自体DC经HBsAg致敏形成的特异性DC疫苗与干扰素联合应用，观察治疗HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者的疗效和安全性。 1 资料与方法 研究对象 为我院肝病中心2005年10月～2006年9月，门诊或住院的慢性乙型肝炎患者66例，诊断均符合2000年西安中华医学会传染病与寄生虫病学会及肝病学会联合修订的《病毒性肝炎防治方案》的诊断标准［1］。其中男45例，女21例；年龄～岁，平均±岁；病程9个月～15年，平均±年。病例纳入标准：（1）血清HBsAg阳性半年以上，且HBeAg阳性，HBcAb阳性；（2）血清HBV-DNA≥1×105copies/ml，血清ALT在正常值上限的2～5倍之间，TBil低于正常值上限的2倍，凝血酶原活动度（PTA）大于60%；（3）依从性好；（4）6个月内未用任何抗病毒药物及免疫调节药物治疗。排除对象：血清抗-HCV、抗-HIV阳性者；自身免疫性疾病者；有明显的心、脑、肾损伤者；甲状腺功能异常者；有血液病、糖尿病、酗酒和吸毒史者；妊娠和哺乳期妇女。 研究方法 主要仪器和试剂 CO2培养箱（Thermo Forma,美国），倒置显微镜（Olympus，日本）,流式细胞仪（Coulter,美国），全自动酶标仪（Thermo，芬兰）。主要试剂：rhGM-CSF、rhIL-4、RPMI1640培养液、鼠抗人CD4，CD8，均购自河北博海生物工程有限公司。HBsAg购自 中国 预防医学 科学 院病毒所。 DC疫苗体外培养 在无菌条件下抽取受试者外周静脉血20ml，肝素抗凝，在百级试验室进行下面操作，生理盐水1：1稀释抗凝血，层加到淋巴细胞分离液2000min离心30min，分离出外周血单核细胞并计数，用1640液洗2次，再加入含有体积分数15%人AB型血清的1640完全培养基重悬细胞。以2×106/ml的细胞浓度加入一次性6孔培养板中，于37℃、5%CO2饱和湿度下培养4h，吸弃上清液，再用1640培养液轻洗2次，除去非贴壁细胞，加入含500U/ml rhGM-CSF和500U/ml rhIL-4的完全培养基，隔日换液，培养至第6天再加入终浓度μg/ml的HBsAg，4h后加入终浓度为10ng/ml的TNF，继续在37℃、5%CO2饱和湿度下培养1天，收获DC疫苗；用生理盐水洗涤2次并计数，即刻在受试者腋下部位常规消毒后经皮下注入体内。 治疗方法 将66例入选患者采用随机对照方法分为：联合治疗组：30例，给予干扰素α-2b（安福隆，天津华立达生物工程有限公司）500万单位，肌注，隔日1次，疗程24周，同时联合DC疫苗回输治疗，每回输两次为1个疗程（中间间隔2周），每个疗程间隔1个月，共进行3个疗程。干扰素治疗组：36例，单独给予干扰素α-2b 500万单位，肌注，隔日1次，疗程24周。两组治疗结束后均随访12周。 观察指标 分别于治疗前、治疗24周结束时、随访12周时，检测血常规、肝功能、乙肝五项、HBV-DNA定量、肾功能、甲状腺功能、记录与治疗有关的一切不良事件。 检测方法 肝功能检测采用瑞士全自动生化分析仪，血清HBV标记物检测采用ELISA法，HBV-DNA检测采用PCR法，以HBV-DNA≥1×103copies/ml为阳性。 统计学方法 计数资料用χ2检验，进行t检验。全部资料用SPSS 软件包处理。 伦 理学 本研究经河北医科大学第一 医院 医学伦理委员会批准，并获得所有患者签署的知情同意书。 2 结果 疗效分析 治疗结束时联合治疗组与干扰素组的疗效比较 联合治疗组和干