血管性痴呆大鼠PSD95变化机制的研究临床医学.docVIP

血管性痴呆大鼠PSD95变化机制的研究临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：血管性痴呆大鼠PSD95变化机制的研究临床医学 1 1 材料与方法 2 2 结 果 3 3 讨 论 4 文2：大鼠血管性痴呆模型 6 1 材料与方法 7 2 结 果 8 3 讨 论 8 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 血管性痴呆大鼠PSD95变化机制的研究临床医学 文1：血管性痴呆大鼠PSD95变化机制的研究临床医学 突触后致密物质95(postsynaptic deity 95，PSD95)在学习记忆、突触可塑性等生理过程和缺血缺氧等病理损伤上具有独特的生物效应〔1～3〕，因而受到国外许多学者的重视，而国内相关研究很少〔4〕，尚未见到PSD95在血管性痴呆(VD)方面的研究报道。本实验通过双侧颈总动脉永久性结扎制备的VD大鼠模型，研究慢性缺血性痴呆的发生发展过程对PSD95表达的影响及由此产生的生物学意义。 1 材料与方法 实验动物及分组 雄性Wistar大鼠128只(吉林大学医学动物中心提供)，体重280～300 g，随机分为假手术组(64只)和VD模型组(64只)，两组根据手术后时间长短，又分为术后1、3 d、1、2、4、8、12和16 w等8个亚组，每组8只大鼠。 VD动物模型制备 大鼠术前12 h禁食，4 h禁水。用10%水合氯醛(3 ml/kg)腹腔注射麻醉，保证手术期间有自主呼吸。仰卧固定，颈前部去毛消毒后沿颈正中切开，分离出双侧颈总动脉，双重丝线结扎，中间离断，建立VD大鼠动物模型。假手术组大鼠除不结扎颈总动脉外，麻醉方法及手术过程均与模型组相同。 检测指标及方法 行为学检测 采用 中国 医学 科学 院生产的Morris水迷宫，以搜索持续时间(逃避潜伏期)和跨越平台次数作为衡量大鼠记忆功能的标准，检测大鼠术前及术后不同时间内水迷宫学习成绩。 脑组织病理标本制备 各组动物分别于相应的时间点深麻下开胸，先后分别用4℃生理盐水(200 ml/鼠)、4℃ 4%多聚甲醛(500 ml/鼠，PBS配制，)经左心室冲洗和灌注固定，灌毕取脑，4℃后固定过夜。常规乙醇脱水，二甲苯透明，浸蜡包埋，连续切片，厚度为5 μm。 PSD95免疫组织化学染色 采用SP 染色法检测组织PSD95的表达，一抗为小鼠抗大鼠PSD95单克隆抗体(效价1∶300，Stressgen公司)，二抗羊抗小鼠IgG(福州迈新生物技术有限公司，效价1∶1 000)。用PBS代替一抗做阴性对照。按SP免疫组化染色试剂盒 (福州迈新生物技术有限公司)说明书操作，DAB 显色系统闭光显色后光镜观察，阳性表现为神经细胞胞浆及胞膜上呈棕黄色。 图像分析 在光学显微镜下观察每一组动物海马区，每只大鼠相同部位连续取10张片子，分别选择5个不重复视野进行观察，测出每高倍视野组织切片的阳性细胞数，所得数据 计算 其均值，再计算每组平均值。 统计学分析 所得计量资料数据用x±s表示，采用方差分析及t检验进行统计学处理。 2 结 果 大鼠行为学检测结果 所有大鼠在术前均行Morris水迷宫测试，确定各大鼠间无明显智能差异，符合标准。术后1 d及3 d的大鼠因其一般状态较差未行水迷宫测试，其余6个时间点均再次检测了水迷宫成绩，发现随缺血时间的延长，大鼠游迷宫时间逐渐增加，跨越平台次数逐渐减少，术后第4、8、12、16周组与假手术组比较均有显著性差异(P)(表1) 海马区组织学改变 常规HE染色显示，假手术组大鼠海马区神经细胞形态及分布正常。手术组术后1 d海马CA1区锥体细胞形态及数量未见明显变化;术后3 d海马CA1区锥体细胞间隙增大，部份胞核深染，并可见细胞体积缩小，核固缩、破裂;术后7 d海马CA1区锥体细胞排列不规则，数量减少，细胞界限不清;术后2 w海马CA1区锥体细胞形态有明显变化，呈三角形，顶树突延长，核深染;术后4 w海马CA1区大量锥体细胞脱失;术后8 w锥体细胞明显减少;术后12 w锥体细胞排列杂乱，脱失显著;术后16 w锥体细胞排列松散、紊乱，严重脱失，细胞浆内有微空泡形成。 海马PSD95免疫组化改变 正常情况下，PSD95阳性细胞呈深棕色，分布于细胞膜上，胞核不着色。假手术组的各时间点的PSD95阳性细胞分布无明显变化。模型组术后1 d与假手术组类似，随术后缺血时间延长，阳性细胞明显增加，以术后2 w最显著(图1)，此后阳性细胞逐渐减少，术后16 w时最少，且散在分布，层次紊乱，锥体细胞数目减少(图2) 不同时间点PSD95免疫阳性细胞数比较 见表2。　表1 术后大鼠水迷宫逃避潜伏期测试成绩表达(DAB，×4