组胺对老龄大鼠肠黏膜分泌型IgA分泌调节的影响.docVIP

组胺对老龄大鼠肠黏膜分泌型IgA分泌调节的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：组胺对老龄大鼠肠黏膜分泌型IgA分泌调节的影响 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 4 文2：何首乌对老龄大鼠免疫功能的影响 6 1 材料 6 2 方法与结果 6 3 讨论 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 组胺对老龄大鼠肠黏膜分泌型IgA分泌调节的影响 文1：组胺对老龄大鼠肠黏膜分泌型IgA分泌调节的影响 肠黏膜免疫是由肠相关淋巴组织的细胞群组成的一种复杂的免疫防御体系，可有效地阻挡肠道内上百种寄生菌及其毒素向肠腔外组织、器官易位〔1〕。Walser〔2〕等报道，组胺受体阻断剂可降低肠黏膜免疫屏障的保护作用，容易导致肠道细菌易位或全身炎症反应综合症（SI）。而肠道给予小剂量组胺有保护肠黏膜屏障和抑制肠道细菌易位的作用〔3，4〕。目前，虽有许多组胺对肠黏膜免疫屏障保护作用方面的研究，但未见组胺对老龄大鼠肠黏膜免疫屏障保护作用方面的报道。本实验旨在通过小剂量、低浓度的组胺肠道内灌注对老龄大鼠肠黏膜分泌型IgA(sIgA)分泌的调节，探索组胺在老龄大鼠肠黏膜免疫屏障保护中的作用，为保护老年人肠黏膜屏障提供理论依据。 1 材料与方法 材料 实验动物 雄性24月龄SD大鼠20只，体重260～280 g，购于河北医科大学实验动物中心。实验前进行适应性饲养48 h，均未发现异常。 主要试剂 组胺（SigmaAldrich公司）；羊抗大鼠sIgA单克隆抗体（AbD serotec公司）；兔抗羊二抗（Kirkegard ＆ Perry Laboratories公司）；发光液（Santa Cruz公司）；巯基乙醇（Promega公司）；其他试剂均为国产优级纯或分析纯。 主要仪器 台式离心机（上海离心机械研究所）；全自动酶标仪（奥地利）；紫外光分光光度计（日本岛津公司）；超低温冰箱（日本三洋）；电泳仪、半干转槽（北京六一仪器厂）；凝胶成像分析系统（南京捷达公司） 方法 实验前准备 蒸馏水配制组胺浓度为100 ng/ml，遮光低温保存备用。戊巴比妥钠用蒸馏水配置成1%浓度备用。 动物模型制备 20只雄性24月龄SD大鼠称重、编号后，随机分为正常对照组（n=10）和实验组（n=10）。所有大鼠实验前12 h禁食。实验时采用戊巴比妥钠腹腔注射麻醉（40 mg/kg）。取腹部正中切口，暴露十二指肠、空肠和回肠，在十二指肠和空肠交界处插管接微泵，在回肠末端接引流管。制模成功后，除对照组外，其他大鼠均立即用微泵分别给予小肠内灌注100 ng/ml浓度的组胺，前1 h灌注速度2 ml/h，后3 h灌注速度1 ml/h。对照组用同样方法向小肠内灌注等量的生理盐水。实验过程中肠引流液放置在冰盒中，4 h后将肠引流液移入-80℃超低温冰箱保存。实验过程中无大鼠死亡。 肠引流液sIgA检测 ①蛋白定量：采用福林酚试剂法（Lowry法）测定。②配胶：先将分离胶注入组装好的两层玻璃板中，在溶液上小心注入一层蒸馏水隔绝空气，放置30 min，待凝胶聚合后，倒掉上层蒸馏水，注入浓缩胶，放置30 min，置于电泳槽中。③电泳：将处理好的样品每孔按含蛋白15 μg加入上样孔中，上槽接负极，下槽接正极，恒流20 mA，待样品进入分离胶后改为40 mA。直到溴酚蓝迁移致距凝胶下端处时关闭电源，停止电泳。④转膜：电泳完毕后，切去浓缩胶，先取三张滤纸放在干转槽负极上，然后将凝胶、转移膜、三张滤纸依次放置，固定好后，恒流电泳45 mA，转移46 min。⑤封闭：转移结束后，将膜置于封闭液中，室温封闭2 h。⑥清洗：用PBS清洗，洗去多余的封闭液。⑦与一抗结合：滴加一抗（用5％BSA 1∶1 500稀释），室温静置过夜。⑧洗膜：TweenPBS（PBS中加入％Tween20）清洗3次，每次10 min，洗去未结合的一抗。⑨与二抗结合：滴加二抗（用5％BSA 1∶5 000稀释），室温静置2 h。洗膜：TweenPBS清洗3次，每次10 min，洗去未结合的二抗。发光，显影：将电化学发光检测法（ECL）发光液1∶1混合后，滴加至膜上，并用底片曝光后，分别显影、定影。曝光的底片用凝胶成像分析系统拍照并测定积分光密度值。 统计学处理 数据用x±s表示，数据分析均采用两样本均数比较的t检验，方差不齐者采用t′检验，采用软件进行统计分析。 2 结果 对照组大鼠小肠引流液sIgA平均含量为（±）mg/L；实验组大鼠肠引流液sIgA平均含量为（±）mg/L，组间比较差异有统计学意义（P＜）。实验表明给予肠道小剂量组胺对老龄大鼠肠黏膜分泌sI