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腺苷预适应对心肌的延迟保护研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：腺苷预适应对心肌的延迟保护研究 1 1 材料与方法 2 2 结 果 5 3 讨 论 7 文2：氟碳停搏液对心肌的保护作用 9 1 全氟化碳代血液 9 2　全氟化碳停搏液对心肌的保护作用 11 3 全氟化碳停搏液保护心脏可能的机制 12 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 15 正文 腺苷预适应对心肌的延迟保护研究 文1：腺苷预适应对心肌的延迟保护研究 心肌短暂缺血后不仅具有即刻的保护作用，同时具有延迟保护〔1〕。腺苷(ADO)及其受体参与了预处理的早期保护作用，同时也是延迟保护的重要介质〔2〕。KATP阻滞剂5羟基癸酸(5hydroxydecanoate，5HD)可以拮抗ADO预处理带来的心肌保护作用〔3〕。KATP是单磷酰脂A(MLA)预处理诱导心肌延迟保护的主要内在机制。本文拟利用外源性ADO A1受体激动剂预处理家兔以模拟缺血预处理的心肌延迟保护效应，探讨ADO预处理心肌延迟保护的受体后机制。 1 材料与方法 主要材料与试剂 清洁级家兔48只，体重～ kg，雌雄不限。ADOA1激动剂2氯6氮环戊烷基ADO(CCPA) (美国Simga公司)；Trizol RNA提取试剂盒(美国Invitrogen公司)；RTPCR按照试剂盒(日本TaKaRa公司)；PCR引物购自Promega公司；其他试剂均为国产分析纯。Newport全自动呼吸机和心输出量检测仪，美国；低温离心机Biofuge22R，德国Heraeus公司；超速离心机，Beckman公司；LKB1251生物发光仪和可见紫外分光光度计，上海分析仪器厂。 动物模型 耳缘静脉注射戊巴比妥钠(30 mg/kg)将兔麻醉后，用肝素500 U/kg抗凝。迅速开胸取出心脏置入改良KrebsHeelert液中，行主动脉和左心房插管，置于灌注架上，以95%O2和5%CO2饱和的KrebsHeelert液经主动脉行Langendorff逆行灌注，温度37℃，灌注压10 kPa。经左心室壁插入压力探头，经压力换能器连接于多道生理记录仪。 Langendorff灌注10 min 后转为工作心状态，即经左房灌注(压力为 kPa)。平衡灌注15 min后，钳闭左心房插管造成全心缺血30 min，然后恢复灌注30 min。灌注完毕，心脏以及再灌注30 min时冠脉流出液标本置-70℃保存。 实验分组 实验动物随机分为4组：对照组(n=12)：心肌缺血/再灌注24 h前静注生理盐水 ml作为对照；(2)CCPA组(n=12)：心肌缺血/再灌注24 h前静注CCPA( mg/kg)作为药物预处理；Gli组(n=12)：心肌缺血/再灌注开始前30 min静注Gli( mg/kg)；CCPA/Gli组(n=12)：CCPA预处理(同第二组)的基础上，在心肌缺血/再灌注开始前30 min静注Gli( mg/kg)。灌注结束后，各组取6只家兔用于心肌梗死范围测定，另6只用于其他观察指标的测定。各组于平衡灌注15 min时测定血流动力学指标作为基础值，测定再灌注末相关指标为实验值。 观察指标 血流动力学参数测定 心脏跳动稳定后，记录心率(HR)、冠脉流量(CF)、心输出量(CO)、左心室舒张期末压(LVEDP)、左心室收缩期峰压(LVSP)。以停灌前工作心功能基础水平为100%，比较复灌末心功能恢复的百分率。 心肌梗死范围测定 灌注结束后，从左心室导管推注2%～3%Eva蓝2～3 ml，2 min后迅速取下心脏，分离缺血区(无蓝色)和非缺血区(蓝色)，将缺血心肌以滤纸吸干，置于天平上称重。再将缺血区水平切成5～6片，每片厚1～2 mm，置入1%TTC磷酸缓冲液()中37℃水浴10～15 min。缺血危险区因脱氢酶还原TTC 而呈红色，梗死区因脱氢酶流失而呈白色，将梗死区和非梗死区分离并分别称重，梗死范围以梗死心肌占缺血心肌重量的百分比表示。 心肌组织超微病理分析 灌注结束后，从心尖部缺血中心边缘区切取1 mm3全层心肌组织数块，放入 mol/L的磷酸戊二醛溶液内()固定，1%锇酸后固定，按电镜要求逐级酒精脱水、EPON812定向包埋、LKBV型超薄切片机切片。醋酸双氧铀及柠檬酸双重染色，用OPTON EM10C型透射 电子 显微镜观察心肌超微结构并摄片。 心肌损伤指标 收集复灌后30 min的心脏冠脉流出液，取标本2 ml，冷冻储存，24 h内送检。使用全自动生化分析仪测定肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)浓度， 计算 30 min的心肌CK和LDH漏出率，CK(LDH)漏出率=C