重组人骨形态发生蛋白7对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用临床医学.docVIP

重组人骨形态发生蛋白7对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用临床医学 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：重组人骨形态发生蛋白7对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用临床医学 1 1 材料与方法 2 2 结果 4 3 讨论 5 文2：人骨形态发生蛋白7重组腺病毒载体的构建临床医学 6 1 材料与方法 7 2 结果 8 3 讨论 8 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 11 正文 重组人骨形态发生蛋白7对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用临床医学 文1：重组人骨形态发生蛋白7对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用临床医学 近年发现，骨形态发生蛋白7（BMP7）可产生显著的抗缺血效应〔1，2〕，并对缺血大脑有内源性神经修复作用〔3〕，但国内外有关BMP7对缺血再灌注损伤影响的研究甚少。本研究观察重组人BMP7（rhBMP7）对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响，为脑缺血再灌注损伤的防治提供新的途径。 1 材料与方法 动物及分组 健康Wistar 大鼠48只，清洁级，雌雄不拘，6～8周龄，体重（±35）g，由沈阳军区总 医院 动物实验科提供。随机分为3组：单纯缺血再灌注组（I组），行脑缺血2 h，再灌注24 h处理，再灌注开始前30 min尾静脉注射等量生理盐水；BMP7预处理组（B组），再灌注开始前30 min尾静脉注射rhBMP7 250 μg/kg，余同I组；假手术对照组（C组）：栓线仅插入8 mm，大脑中动脉起始部不阻塞。 试剂 rhBMP7蛋白（山东省生物技术研究中心产品，批号0523）。其他试剂均为国产生化纯试剂。 脑缺血再灌注模型制作 采用Longa大脑中动脉线栓法〔4〕，制备大鼠局灶性脑缺血再灌注(MCAO)模型。大鼠用10%水合氯醛( ml/100 g)腹腔注射麻醉。大鼠仰卧固定于手术台上，颈部正中切口，分离右侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉。结扎、游离颈外动脉主干。分离颈内动脉主干至翼腭动脉，结扎翼腭动脉。颈外动脉残端剪一小口，将栓线插入。轻推尼龙线尾端经颈总动脉叉部沿颈内动脉入颅。尼龙线插入深度由分叉部计(±)mm 。缺血再灌注组于术后2 h将尼龙线拔出。术中用白炽灯加温，维持大鼠肛温37℃左右。苏醒后自由饮水进食。于再灌注24 h取材检测。 神经功能缺损评分 MCAO模型制备后，观察动物神经功能缺损情况，采用Longa法进行神经功能缺损评分〔4〕。0分:无神经损伤体征；1分：不能完全伸直对侧前爪；2分：向外侧转圈；3分：向对侧倾倒；4分：不能自主行走，意识丧失。 脑含水量测定 断头取脑枕顶叶脑皮质100 mg左右，于100℃恒温烘干24 h，根据公式计算：脑组织含水量（%）= (湿重－干重) / 湿重×100% 脑梗死体积测定 每组随机取8只大鼠，在脑缺血再灌注后24 h，水合氯醛麻醉，快速断头取脑，置冰箱冷冻1 h后取出，行2 mm厚冠状切片。将切片立即置于2% 2,3,5三苯基氯化四氮唑溶液中(TTC，磷酸缓冲液调至pH为)37℃恒温下避光染色30 min，正常组织染为红色，梗死组织染为白色。甲醛固定24 h。利用图像分析仪测每个脑片面积和梗死面积，根据公式V=t(A1+A2+…An)(A1+An)t/2计算梗死体积(V)，其中t为切片厚度，A为梗死面积。计算脑梗死体积比（%）=脑梗死体积/全脑体积×100% 额叶皮质神经元超微结构观察 取大鼠脑梗死灶与正常交界处约1 mm ×1 mm ×2 mm组织，经%戊二醛固定，1%锇酸固定后常规脱水，环氧树脂包埋，制成超薄切片。柠檬酸铅醋酸铀染色，JEM1200EX型透射电镜下观察脑组织超微结构变化。 统计学处理 采用统计学软件进行分析，计量资料以x±s表示，组间比较采用单因素方差分析。 2 结果 BMP7对脑缺血再灌注损伤神经功能缺损评分的影响 I组与C组比较有显著差异(P)，B组评分明显减少，与I组、C组比较均有显著性差异。见表1。 BMP7对脑缺血再灌注损伤脑含水量的影响 I组与C组比较有显著差异(P)，与I组比较，B组脑含水量明显降低。见表1。 BMP7对大鼠梗死灶体积的影响 脑梗死灶主要出现在B组与I组，C组未发现梗死病灶。I组及B组的梗死病灶主要位于额顶背外侧皮质、海马区、齿状回等区域。B组梗死病灶体积明显小于I组(P)。见表1。 表1 BMP7对脑缺血再灌注损伤各项指标的影响（略） 与C组比较：1）P；与I组比较：2）P 电镜超微结构观察 C组超微结构未见异常，核仁明显，线粒体嵴清晰。I组超微结构损伤严重，核呈高度固缩状态，核内染色质高度凝聚，细胞质高度水肿，细胞器减少，