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急性缺血心肌脂肪酸代谢的变化 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：急性缺血心肌脂肪酸代谢的变化 1 1 材料与方法 2 2 结 果 3 3 讨 论 4 文2：急性哮喘患儿体内T细胞亚群的变化 5 1 资料与方法 6 2 结果 6 3 讨论 7 参考文摘引言： 7 原创性声明（模板） 9 文章致谢（模板） 9 正文 急性缺血心肌脂肪酸代谢的变化 文1：急性缺血心肌脂肪酸代谢的变化 缺血性心脏病是世界范围内主要的致死和致残原因，仍需寻找更有效的 治疗 缺血心肌的方法〔1〕。事实上受损的能量供给是缺血性心脏病的中心环节〔2〕。心肌缺血时脂质代谢的改变，可引起膜的流动性、渗透性或信号级联的变化，对心脏的生理功能产生复杂影响。心脏型脂肪酸结合蛋白（hearttype fatty acidbinding protein，HFABP）富含于心肌细胞的胞浆内，参与了心肌脂肪酸的代谢过程，对心肌细胞有不同方面的保护作用〔3〕。目前急性缺血心肌组织HFABP 表达研究仅有急性心肌缺血后20、40 min及1 d后的变化〔4，5〕。本研究观察急性心肌缺血后1～12 h心肌组织HFABP动态表达，以期揭示HFABP在急性心肌损伤中的改变，为临床防治急性心肌缺血提供新思路。 1 材料与方法 主要试剂 山羊抗大鼠HFABP抗体(Santa cruz,美国)，小鼠抗GAPDH抗体购自上海康成生物公司，HFABP引物、βactin引物由上海生工公司合成。 动物模型及分组 SD大鼠60只，购于河北医科大学动物中心（动物中心许可证：04064），雄性,体重250～300 g，随机分为6组，每组10只。对照组：麻醉开胸穿线不结扎组;实验1组：心肌缺血1 h组(模型成功7只);实验2组：心肌缺血2 h组(模型成功8只);实验3组：心肌缺血4 h组(模型成功8只);实验4组：心肌缺血6 h组(模型成功7只);实验5组：心肌缺血12 h组(模型成功6只) 实验组按Selye法〔6〕结扎大鼠左冠状动脉前降支复制急性心肌梗死动物模型：以3%戊巴比妥钠麻醉大鼠后，固定动物、皮肤消毒、气管插管、接动物呼吸机，于左锁骨中线第4、5肋间钝性分离肌层开胸，轻压胸廓及腹部，挤出心脏，以肺动脉圆锥和左心耳交接处为标志，于左冠状动脉起始端，穿过心肌浅中层快速结扎，肉眼观察心脏左室前壁颜色变苍白，迅速还纳心脏入胸腔。观察心电图，以肢体Ⅱ导联ST段抬高≥ mv或Q波明显增宽持续30 min以上为结扎成功的客观指标。行TTC及Eva染色区分梗死区、缺血区和非缺血区。对照组开胸后即刻取心肌，实验组分别于左前降支闭塞后1、2、4、6、12 h麻醉后腹主动脉放血处死留取缺血区心肌组织，-80℃保存。 石蜡包埋HE染色心肌组织 取结扎线下心室组织，用4%多聚甲醛固定、脱水、石蜡包埋、切片后进行HE染色，封片后光学显微镜下观察心肌组织病 理学 改变。 Western印迹法检测 （1）提取各组心肌组织总蛋白，用BCA法进行蛋白定量。每组各取100 μg 蛋白经15%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，将蛋白转移至PVDF膜，再用一抗（HFABP多抗1∶100）4℃过夜，二抗（抗山羊1∶3 000）室温孵育1 h， DAB显色，数码相机拍照，凝胶图像分析系统（GelPro Analyzer Veion ）分析结果。 血清游离脂肪酸的测定 根据游离脂肪酸（FFA）检测试剂盒（南京建成生物公司研究所）说明进行。用铜试剂测定其中铜离子的含量，即可以推算出游离脂肪酸的含量。 统计学分析 数据均以x±s表示。采用SPSS 统计软件,组间差异用单因素方差分析（one way ANOVA）,有显著差异者用最小显著差法（least significant difference，LSD）进行两两比较。 2 结 果 心肌组织病理学检查 对照组大鼠心肌细胞排列整齐，染色清晰，边界清楚，横纹清晰，无变性，间质无水肿、出血;缺血1 h组的心肌细胞出现波纹状改变,但心肌细胞间质无水肿出血,未见心肌细胞肌浆凝集或肌溶性破坏及炎症反应；缺血2、4 h组与1 h组比较心肌细胞明显肿胀，嗜伊红性增强,仍有波纹状改变,并且缺血4 h组有部分心肌或肌节出现节段性凝聚或收缩，形成“收缩带”；缺血6、12 h组出现心肌细胞边界不清，肌纤维横纹模糊，细胞破碎，局灶性心肌细胞凝集坏死，缺血12 h组有大量炎性细胞(主要是嗜中性粒细胞)浸润（图1） 各组缺血心肌组织中HFABP蛋白的表达 Western印迹法检测各组大鼠心肌GAPDH蛋白，均见明显的36 kD条带，各组IOD值与对照组相比均无统计学差异（P＞）,证实各组蛋白上样量相同；