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DNA甲基化和临床应用;目录;为何熊猫是黑白 ？; 同卵双生 孪生子含有完全相同 基因组。但她们长大成人后在性格、健康方面往往存在很大差异。;先从表观遗传学谈起;现代表观遗传学;不一样层次表示调控;DNA甲基转移酶: DNMT 胞嘧啶: Cytosine 5’-甲基胞嘧啶: 5-Methylctosine S-腺苷-甲硫氨酸: SAM S-腺苷- 高半胱氨酸: SAH;DNA甲基转移酶(DNMT);通常开启子和第一个外显子区, CpG序列密度非常高, 超出均值5倍以上, 成为鸟嘌呤和胞嘧啶 富集区。 结构基因组中70%～ 90% 独立CpG 都被甲基化, 未甲基化 CpG 成簇地聚集形成CpG 岛 约有60％以上基因 开启子含有CpG岛。 — 是结构基因开启子 关键序列和转录起始点。;目录;DNA甲基化 生物学作用; DNA甲基化作为一个可遗传 表观遗传修饰, 在体细胞增殖过程中经过依靠于DNA复制 DNA甲基转移酶Dnmt1稳定地传输给子细胞。但在胚胎发育 不一样时期, 基因组范围内 DNA甲基化水平会发生猛烈 改变, 改变最猛烈 阶段为配子形成期与早期胚胎发育阶段, 甲基化模式在配子形成时已经建立。;DNA甲基化在动物胚胎和生殖细胞发育过程中 重编程;CPG island 功效: 经过甲基化与去甲基化, 调控下游基因 表示 —— 基因表示 调控开关;影响基因表示; IAP: intracisternal A particle 去甲基化: 灰鼠基因（agouti）仅微量表示 甲基化: 基因超量表示;X染色体 失活;基因组印记？;差异甲基化区域 ;碱基C T突变; 肿瘤细胞发生时常出现DNA甲基化模式 改变, 关键包含甲基化转移酶表示水平 提升、基因组整体甲基化水平 降低和CpG岛局部甲基化水平 异常升高, 从而造成基因组不稳定, 如染色质构象异常、转座子激活、原癌基因激活表示以及抑癌基因被抑制表示等。;目录;A．基因组甲基化水平(Methylation Content) 分析 高效液相色谱 高效毛细管电泳法 B．候选基因(Candidate Gene)甲基化分析 甲基化敏感性限制性内切酶-PCR/Southern法 重亚硫酸盐测序法 甲基化特异性 PCR 甲基化荧光法(MethyLight) 焦磷酸测序 结合重亚硫酸盐 限制性内切酶法;C. 基因组范围 DNA甲基化模式与甲基化谱分析 限??性标识基因组扫描 甲基化间区位点扩增 甲基化CpG岛扩增 差异甲基化杂交 由连接子介导PCR出 HpaII小片断富集分析 甲基化DNA免疫沉淀法 ;高效液相色谱法;直接测序法;焦磷酸测序法;全基因组甲基化图谱;芯片平台;目录;正常生物DNA甲基化;肿瘤组织 DNA甲基化;;应用前景1--肿瘤 早期诊疗;表观遗传学生物标识开发; 燃石医学自主研发了无创甲基化检测系统(MERMAID?), 利用多层级甲基化探针设计策略, 可实现在检测成本可控 情况下同时检测超出10万个临床诊疗相关 甲基化CpG位点, 并经过机器学习算法建立分类模型, 实现对检测样本自动分型。 cfDNA无创甲基化检测系统(MERMAID?) 用于肺部占位病变（含肺癌） 早筛可实现99.6% 敏感性和100% 特异性, 用于肺部结节良恶性判定可实84.8% 敏感性和87.5% 特异性。;应用前景2--肿瘤复发 独立估计因子;应用前景3--肿瘤 去甲基化诊疗;优点: 新型抗肿瘤药品 缺点: 无基因特异性,不能选择性地活化缄默 目 基因, 从而会引发整体 低甲基化; 药品 活化作用可逆, 疗效依靠于药品 连续存在; 大剂量应用时会对正常细胞有毒副作用; MGMT基因在很多肿瘤中被认为是抗肿瘤药品诊疗 估计标识。MGMT开启子肿瘤特异性甲基化, 能够抑制MGMT蛋白 活性, 从而使得肿瘤细胞对烷化类 抗肿瘤药品敏感, 所以被广泛用于肿瘤化疗诊疗。 ;Thank You!