中药学成分的分离方法.pptVIP

色谱法根据分离原理可分为：吸附色谱、分配色谱、凝胶色谱与离子交换色谱等； 根据分离方法又可分为： 薄层色谱法（thin layer chromatography，TLC） 柱色谱法（column chromatography） 纸色谱法（paper chromatography，PC） 高效液相色谱法和气相色谱法等 （一）吸附色谱法 1．基本原理 2．常用吸附剂 （1）硅胶 （2）氧化铝 硅胶和氧化铝含水量越高、活性级别越大，吸附活性越弱。 只要在110℃左右加热，这些“自由水” 就能被可逆性地除去。利用这一原理可以对吸附剂进行活化（去水）和脱活化（加水）处理，以控制吸附剂的活性。  硅胶、氧化铝的含水量与活性级别 活性级别 硅胶含水量% 氧化铝含水量% Ⅰ 0 0 Ⅱ 5 3 Ⅲ 15 6 Ⅳ 25 10 Ⅴ 38 15 （3）聚酰胺 （4）活性炭 1）粉末状活性炭 2）颗粒状活性炭 3）锦纶活性炭 3．展开剂 化合物被吸附剂吸附后，需用合适的溶剂进行展开，这种溶剂称为展开剂，在柱色谱中习惯称为洗脱剂。展开剂在吸附色谱中主要作用是解吸附。 在吸附色谱中，展开剂的展开能力与其极性有关。对于极性吸附剂，展开剂的极性越大，其展开能力越强，化合物在色谱中移动的速度就越快，而对非极性吸附剂则相反，展开剂的极性越小，其展开能力越强。 4．被分离成分 被分离成分与吸附剂、展开剂共同构成了吸附色谱中的三要素。 对硅胶、氧化铝等极性吸附剂来说，对极性大的化合物吸附强，移动慢，Rf值小；而对极性小的化合物吸附弱，Rf值大，从而将各成分分离开。全面考虑吸附剂、展开剂和被分离成分三者的相互关系，是分离成败的关键。 5．操作方式 吸附色谱常见的操作方式是薄层色谱和柱色谱。薄层色谱主要用于化学成分的预试、鉴定及探索柱色谱分离的条件，柱色谱主要用于化学成分的分离制备及含量测定。 （1）吸附薄层色谱法 此法是将吸附剂均匀地铺在玻璃板上形成薄层，把欲分离的试样溶液点加到薄层板的一端，然后用合适的展开剂展开，使混合物中各成分得以分离的方法。 吸附薄层色谱的操作主要包括铺板（制板）、点样、展开和显色四个方面。实际工作中常用硅胶-羧甲基纤维素钠（硅胶CMC-Na）薄层板，展开方式有上行法、下行法、单向展开、双向展开等多种。 将计算出的Rf值与已知化合物的Rf值对照，也可与文献上记载的Rf值比较，进行定性鉴别。 薄层色谱广泛应用于植物各类化学成分的分离鉴定，也可应用于中草药品种、药材及其制剂真伪的检查、质量控制和资源调查。《药典》一部采用薄层色谱法作鉴别的中药材和中药成方制剂品种已达1523种 （2）吸附柱色谱法 吸附柱色谱法是将试样加入到一定规格装有吸附剂的玻璃柱里，再用适当的溶剂洗脱，使结构性质不同的成分达到分离的方法。其分离原理、吸附剂和洗脱剂的选择均与吸附薄层色谱法基本相同。柱色谱的具体操作可分为装柱、加样和洗脱三步。 （二）分配色谱法 分配色谱法是一种利用混合物中各成分在互不相溶的两相溶剂中分配系数的不同，进行分离的色谱方法。 1．基本原理 1．基本原理 分配色谱的原理来自于两相溶剂萃取法。 2．载体 载体又称支持剂、担体，在分配色谱中只起支持固定相的作用，　对被分离成分无吸附作用，而且作为分配色谱的载体均为中性多孔粉末，不溶于两相溶剂中，也不与被分离成分发生化学反应。 3．固定相、流动相与被分离成分 据固定相与流动相的极性差别，分配色谱有正相与反相色谱法之分。在正相分配色谱法中，流动相的极性小于固定相极性，而在反相分配色谱法中，流动相的极性则大于固定相的极性。 反相分配色谱法应用广泛，其常用的固定相是在普通硅胶表面进行化学修饰，键合上长度不同的烃基（R）形成亲脂性表面，习称键合相，如十八烷基或辛基硅烷键合相。 4．操作方式 （1）纸色谱法 （2）分配薄层色谱法 （3