利用流式细胞仪进行不规则形状样品检测的改造.docxVIP

利用流式细胞仪进行不规则形状样品检测的改造 项目简介 （一）拟进行功能开发的仪器设备现状描述 流式细胞仪是将流体喷射技术、激光技术、空气技术、γ射线能谱术及电子计算机等技术与显微荧光光度计密切结合的一种非常先进的检测仪器。通过测量细胞及其他生物颗粒的散射光和标记荧光强度，来快速分析颗粒的物理或化学性质，并可以对细胞进行分类收集，可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个细胞特征参数，进行定性或定量分析，具有速度快、精度高、准确性好等特点。 工作原理：将待测细胞染色后制成单细胞悬液，用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域 流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模／数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。 细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。 使用领域主要有以下几个方面：细胞周期分析、细胞内钙离子浓度、pH测定，检测癌基因与抗癌基因表达在肿瘤发生、发展过程中的作用，细胞凋亡，化疗药物作用机制及辽效评价，白血病、淋巴瘤研究。网织红细胞计数，血小板疾病诊断，HLA群体分析、AIDS研究等。 现有流式细胞仪设计用于进行圆形细胞的检测，对异性细胞的检测效果不佳，而自然界中存在很多非球形的细胞，大大的限制了设备的使用范畴。 （二）功能开发完成后能够解决的具体科研问题及其意义 功能开发完成后能够使用流式细胞仪进行不规则形状细胞的各项指标检测，具体可应用于扁平状细胞检测，如动物精子检测，藻类扁平细胞检测，不规则形状细胞检测等。 试验结果表明，利用流式细胞分离仪分离的奶牛精液对后代性别比例的影响十分显著。该精液分离技术具有操作简便、思路新颖、方法独特、准确率高、便于推广等特点。如将性控精液技术推广应用于奶牛生产中，不仅可以促进奶牛业的快速发展，每年可多产母牛几万头，更重要的是将提高对某些性状的选择强度，加快良种奶牛的繁殖速度。?　　流式细胞仪在海水微型浮游生物监测领域应用较为广泛,但在淡水藻类定量研究以及生物监测中应用仍较少。探讨了应用便携式浮游植物流式细胞仪监测藻类的可行性和时效性。,流式细胞仪操作简单、分析速度快、便携性好、无污染,在藻类监测中具有广泛的应用前景。 （三）预期成果及应用领域 实现对不规则细胞进行检测，将广泛应用细胞周期分析、细胞内钙离子浓度、pH测定，检测癌基因与抗癌基因表达在肿瘤发生、发展过程中的作用，细胞凋亡，化辽药物作用机制及辽效评价，白血病、淋巴瘤研究。网织红细胞计数，血小板疾病诊断，HLA群体分析、AIDS研究等。提高动物不规则细胞检测的准确性和可靠性。 针对植物细胞和藻类细胞中有稳定形态的细胞进行检测。 建立一套针对不规则细胞检测的可行性解决方案。 项目进展 支架部分已经改造并进行初步安装 液流聚焦部分：利用流体力学液流聚焦的原理，对现有流式细胞仪的液流系统进行改进。经测试设计的多个聚焦系统中，其中一个曲面聚焦系统对不规则细胞定位有改善效果。 经过不规则细胞的测试，对于扁平细胞有显著定位现象： 红色部分表示密集分布，可见在右侧的细胞有明显的定位现象