生物化学教学课件：蛋白质.pptVIP

Fe2+有6个配位键，其中4 个和吡咯环的N配位结合，1个与93位(F8) His结合，氧与Fe2+形成第6 个配位键，接近64位 (E7) His。 （二）血红蛋白(Hemoglobin) 血红蛋白（Hb）由四个亚基(珠蛋白)和血红素组成。成人红细胞中主要为HbA1(α2β2)，其中α链141aa，β链146aa，各带有一个血红素与O2结合，所以一分子Hb能与4分子O2结合。不同发育阶段α链相同, β链不同，胎儿期为αγ， 胚胎期为αε。 说明Mb对氧有很强的亲和力。在体内毛细血管中氧分压大于4KPa(30mmHg)，组织中Mb几乎全与O2结合而达到饱和，只有细胞内氧耗很大而使PO2下降到很低时， Mb才释放其中的氧，故组织中的肌红蛋白是很好的储氧物质。 Mb 的P50=0.13KPa(1mmHg) Mb：Mb与O2结合的直角双曲线提示单个血红素与1个O2结合的一个恒定平衡常数 （三）Mb与Hb的氧饱和曲线 Mb为直角双曲线， Hb氧饱和曲线为S形。 Hb：Hb与O2结合的S型曲线提示其4 个亚基与4 个O2结合时平衡常数不同。 K1＜ K2 =K3＜ K4 协同效应:一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一亚基与配体的结合能力（正协同效应、负协同效应）。 Perutz等利用X线衍射分析了Hb和氧合Hb的三维结构图谱，解释了正协同效应。未结合O2时，Hb结构紧密，称为紧张态（T态），T态Hb与O2亲和力小；结合O2 后，结构变得相对松弛，称为松弛态（R态）。 变构效应（allosteric effect）：一个蛋白质与它的配体或其它蛋白质结合后，蛋白质的构象发生变化，使它更适合于功能需要。小分子O2称为变构剂。 Bohr效应：1904年Christian Bohr发现Hb与O2的结合也受CO2及pH影响。PCO2升高时， Hb与O2的结合降低，酸性溶液中Hb与O2的亲合力也降低，氧解离曲线右移。 故PCO2升高实际上是pH下降影响Hb。pH降低，即溶液中H+浓度升高，使-NH2及咪唑基等质子化，有利于分子内部盐键的形成，使Hb结构趋向紧密，从而降低Hb与O2亲和力，Mb没有四级结构也就没有Bohr效应。 Bohr效应使Hb运输O2效率更为提高。肺部呼出CO2，PCO2下降，Hb与O2亲和力加强，利于结合更多氧输入体内。当血液流经组织时，CO2自组织进入血液，PCO2升高，pH下降，Hb与O2亲和力减弱，有利于O2释放入组织。 5、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量 蛋白质颗粒在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，其迁移率决定于其所带的净电荷、分子大小和形状等。 如果在聚丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）和巯基乙醇，则蛋白质迁移率主要取决于其相对分子质量，而与原来所带的电荷和分子形状无关。 SDS是一种有效变性剂，能破坏蛋白质分子中的氢键和疏水作用，而巯基乙醇能破坏二硫键，因此在二者作用下，单体蛋白质或亚基处于展开状态，SDS与蛋白质分子结合成复合体。 复合体的形成造成了2种结果： 1、不同蛋白质被阴离子SDS覆盖而具有相同密度的负电荷； 2、不同蛋白质单体分子由于SDS结合而具有统一的直径，但长度随蛋白质相对分子质量成正比变化。 聚丙烯酰胺凝胶的分子筛效应，使得电泳迁移率与多肽链分子量有如下关系： Log Mr = K1 – K2 （样品迁移距离 / 前沿迁移距离） 由于蛋白质分子上除了肽链两端有自由的α-NH2和α-COOH外，在侧链上还有很多解离基团（ε-NH2、γ-COOH、β-COOH、咪唑基、胍基（精氨酸）），在一定的pH条件下都能解离成带电基团，而使蛋白质带电。 二、两性电离及等电点 等电点：当溶液在某一定pH环境中，使蛋白质所带正、负电荷相等，净电荷为零，在电场中不向阳极也不向阴极移动。 H 2 O + P C O O - N H 2 H + O H _ P N H 3 + C O O - P N H 3 + C O O H H + O H - pH ＞ pI pH ＜ pI pH =pI 酸性氨基酸pI＜7，碱性氨基酸pI ＞7。蛋白质pI与所含氨基酸种类和数量有关，若蛋白质中碱性aa较多，其pI偏碱，如从雄性鱼类精子中提取的鱼精蛋白含Arg多，其pI 约为12 ； 若含酸性aa较多，则pI偏酸。 蛋白质在等电点时其溶解度、导电性、粘度、渗透压最小。 蛋白质等电点性质为电泳分离的依据. 三、胶体性质 蛋白质水溶液是一种比较稳定的亲水胶体，这是因为蛋白质颗粒表面带有很多极性基团（亲水基团向外翻，疏水基团向内钻），在蛋白质颗粒外面形成一层水膜（