大三下学期课件细胞工程细胞融合.pptx

第五章 细胞融合与单克隆抗体;重点;第一部分 细胞融合;内容;1.细胞融合概述;定义;显微镜下细胞融合过程;类型区分;;类型区分;动物克隆;研究进展;骨骼肌;合体滋养层细胞;J Clin Dermatol, February 2008, Vol.37, No.2;蛙血细胞融合;Potato + Tomato = Pomato;生物种类;2细胞融合的基本原理;显微镜下细胞融合过程;细胞互相靠近;融合过程中两个细胞膜从彼此接触到破裂形成细胞桥的变化过程图解;3细胞融合的常用方法与技术;自然细胞融合;诱导融合研究进展;诱导融合方法;病毒诱导法;病毒诱导细胞融合;化学法（聚??二醇）;PEG;PEG;PEG融合原理;聚乙二醇（PEG）法细胞融合过程;PEG诱导蛙血细胞融合;PEG融合特点;物理法（电融合法）;电融合诱导原理;电融合诱导原理;电融合的基本过程;电融合基本过程;电融合的特点;4杂交细胞的筛选;融合细胞的类型;;基于酶缺陷型细胞和药物抗性的融合细胞筛选 基于营养缺陷型细胞的融合细胞筛选 由温度敏感型细胞组成的融合细胞筛选 具有所需性状融合细胞的融合细胞筛选;1）遗传互补筛选法：利用每一亲本贡献一个功能正常等位基因，纠正另一亲本的缺陷，令融合细胞表现正常。 亲本A：HGPRT- /TK+ 亲本B：HGPRT+ / TK- 杂交细胞：HGPRT+ / TK+ 在HAT培养基中杂交细胞存活，A、B死亡;HAT选择系统;HAT筛选;2）营养互补筛选系统：细胞在缺乏一种或几种营养成分时，不能生长繁殖即营养缺陷型细胞。利用两种亲本细胞营养互补作用原理可以筛选融合细胞。 亲本A：色氨酸缺陷型 亲本B：苏氨酸缺陷型 融合细胞可以在不含色氨酸和苏氨酸的培养基上培养，而亲本细胞均会死亡。;3）温度敏感突变型融合细胞的筛选：一般的培养细胞能在32度到40度的范围内生长，但温度敏感突变型的细胞能在高温或低温下生长。由此筛选融合细胞。 亲本一：低温敏感突变型，可在低温下生长，在高温下死亡。 亲本二：高温敏感突变型，可在高温下生长，在低温下死亡。 融合细胞能在高温和低温下生长。;;5融合细胞的克隆;克隆化的目的;融合细胞的克隆方法;56;57;58;琼脂平板;细胞融合的意义;本部分小结;本部分小结