盐酸贝那普利对自发性高血压大鼠肾脏纤维化的影响.docVIP

盐酸贝那普利对自发性高血压大鼠肾脏纤维化的影响 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：盐酸贝那普利对自发性高血压大鼠肾脏纤维化的影响 1 1材料和方法 2 文2：盐酸贝那普利对自发性高血压大鼠肾脏纤维化的影响 6 1材料和方法 6 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 13 正文 盐酸贝那普利对自发性高血压大鼠肾脏纤维化的影响 文1：盐酸贝那普利对自发性高血压大鼠肾脏纤维化的影响 肾素-血管紧张素系统（RAS）除了作为一种循环内分泌系统外，亦作为一种肾脏局部内分泌、旁分泌和细胞内分泌系统，在肾脏疾病的发生发展中发挥重要作用，与肾脏纤维化关系密切. 血管紧张素Ⅱ (Ang II)是RAS中最主要的生物活性物质之一，参与肾脏损害的发生发展［1］. 研究证实，Ang II可引起血流动力学紊乱、水盐代谢失调以及促进肾脏疾病进展. 高血压终末期常常伴有肾脏损害. 因此，我们选择自发性高血压大鼠（spontaneously hyperteive rats，SHR）为实验模型，探讨血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）盐酸贝那普利对高血压肾脏纤维化的影响及其作用机制，为ACEI在减轻肾脏纤维化中的应用提供新的理论依据。 1材料和方法 材料13 wk龄雄性SHR 12只以及年龄、性别匹配的WistarKyoto正常血压大鼠（WKY）6只，均由第四军医大学实验动物中心提供. 盐酸贝那普利 (诺华制药有限公司，商品名为洛汀新)；PCR引物由上海博雅生物技术有限公司合成；RTPCR试剂盒 (TaKaRa公司). 大鼠尾动脉血压测量仪(中日友好医院制造). 血管紧张素转换酶（ACE）测定试剂盒购自海军总医院. Ang II浓度的测定按中国原子能科学研究院提供的试剂盒的测定方法检测。 方法 ： ① WKY组（n=6）；SHR随机分为： ② SHR组（n=6）. ③ SHR+盐酸贝那普利组（SHRB组，n=6）. SHRB组每日经胃管给予盐酸贝那普利 10 mg/(kg?d)，WKY和SHR组每日经胃管给予等量的生理盐水. 共给药8 wk. 戊巴比妥钠（40 mg/kg）腹腔麻醉，于冰上分离肾脏. 将部分肾组织中性甲醛固定后作石蜡包埋切片，其余组织液氮速冻，-80℃冰箱保存待用. 尾压法测定血压，1次/wk。 ，光镜下观察. Masson染色计算机图像半定量分析间质纤维化程度，胶原面积比(%)=（胶原面积/总面积）×100% mg，加入 mol/L磷酸钾缓冲液2 mL匀浆，4℃， 13 000 g/min离心30 min，上述缓冲液洗涤3次. 沉淀以5 mmol/L CHAPS重新混匀，4℃过夜，4℃， 15 000 g/min离心30 min，取上清液，-20℃保存待测. 采用分光光度法测A228 nm值。 II含量测定肾皮质称质量后，在含 mol/L NaCl， mol/L NaH2PO4， mol/L Na2HPO4， 5 mmol/L EDTA， 5 mmol/L 8羟基喹啉的缓冲液（pH ）中进行匀浆。 （RTPCR）. I型胶原引物： 上游5′ TGC CGT GAC CTC AAG ATG TG 3′，下游5′ CAC AAG CGT GCT GTA GGT GA 3′， PCR产物长度为462 bp；扩增条件： 94℃，变性5 min，然后再94℃变性1 min， 60℃退火30 s， 72℃延伸30秒，共35个循环，最后72℃延伸10 min. III型胶原引物： 上游5′ AGA TCA TGT CTT CAC TCA AGTC 3′， 下游5′ TTT ACA TTG CCA TTG GCC TAG 3′，PCR产物长度为480 bp；扩增条件除退火温度为64℃以外其余与I型胶原一样. 内对照GAPDH长度为231 bp，引物： 上游5′ ACG GCA AAT TCA ACG GCA CAG TCA 3′ ，下游5′ TGG GGG CAT CGG CAG AAG G 3′. 退火温度为61℃. 所有引物均由上海博亚生物技术有限公司合成. PCR产物经15 g/L琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统（UV Trailluminator）进行图像分析测得其密度比值。 统计及处理： 实验数据均以x±s表示，各组间比较采用方差分析及LSDt检验，组间方差不齐时，采用秩和检验. P＜表示有统计学意义。 2结果 大鼠收缩压的变化用药后第1， 2， 4， 6， 8周，SHRB组尾动脉血压比用药前及SHR组明显降低（均P 肾组织的病理学改变HE及Masson染色均显示SHR组肾脏组织间质增宽，肾小管上皮细胞萎缩，成纤维细胞