微生物菌种的筛选及鉴定.pptVIP

（3）变色圈法 淀粉平板喷稀碘液：透明圈，液化型淀粉酶 支链淀粉平板喷稀碘液： 蓝色圈：异淀粉酶 无色圈：液化型淀粉酶 葡聚糖平板加刚果红：葡聚糖酶 木聚糖平板加刚果红：木聚糖酶 第30页，共70页，编辑于2022年，星期日 （4）生长圈法 工具菌： 营养缺陷型，不能合成的物质（生长因素）为目的菌积累的产物 菌落形态明显不同于目的菌 方法：106~107 工具菌与样品稀释液一起涂布至琼脂培养基表面，具有生长圈的菌落即为目的菌 适用：氨基酸，核苷酸，维生素产生菌的选育 第31页，共70页，编辑于2022年，星期日 （5）抑制圈 适用：抗生素产生菌的选育 工具菌：对目的抗生素敏感的微生物 例：目的菌为产生抗G+细菌的抗生素的菌株 工具菌可使用金黄色葡萄球菌 方法 目的菌分离：稀释分离法，培养长出菌落 代谢物积累：用打孔器（6MM）将菌落连同周围琼脂培养基一起取下，放一无菌空培养皿内，保湿培养4-5d，使新产生抗生素积累于小琼脂块中 测定：取107工具菌涂布于琼脂培养基，将小琼脂块放于上面培养过夜，抑菌圈的出现，说明琼脂块中有抗生素，大小说明抗生素单位的高低 第32页，共70页，编辑于2022年，星期日 琼脂块培养法筛选抗生素产生菌程序 第33页，共70页，编辑于2022年，星期日 （6）菌落特征 从形态的角度 菌落的外观形态，是微生物的一个重要表征。如多糖产生菌在适当的培养基上生长，从具有粘液性的菌落外观上就可以初步识别。 第34页，共70页，编辑于2022年，星期日 * （7）从产物角度出发 在培养时以产物的形成有目的的设计培养基 利用简单、快速的鉴定方法，如抗生素 产物分子的结构定性分析（利用紫外扫描光谱、核磁共振、CD谱、高压液相色谱、远红外分析、X-射线衍射分析、穆斯堡尔谱等） 产物的定量分析 第35页，共70页，编辑于2022年，星期日 3、厌氧性微生物的分离法 （1）去除培养基中的溶解氧，降低Eh（氧化还原电位） 煮沸法：将培养基置沸水中煮沸15分钟，驱除其中的溶解氧，勿再摇动，Eh可降至0.1V 以下 培养基预还原：将培养基中加入还原性物质：半胱氨酸，巯基化生物，Na2S，抗坏血酸等降低Eh 第36页，共70页，编辑于2022年，星期日 （2）创造无氧环境 物理除氧 空气置换法：干燥器或厌氧培养罐 抽真空 76mmHg→充入N2 （反复3次）→充入CO2 10% +H2 10% + N2 80% 化学除氧 H2 + O2 → H2O (钯作催化剂） GASPAK罐除氧：硼氢化钠、柠檬酸，碳酸氢钠化学反应产生H2 和CO2，H2与O2反应生成水 厌氧指示剂 第37页，共70页，编辑于2022年，星期日 （3）厌氧分离（培养）技术 高层琼脂柱技术 厌氧罐技术 厌氧手套箱技术 厌氧手套箱 第38页，共70页，编辑于2022年，星期日 厌氧培养装置 第39页，共70页，编辑于2022年，星期日 第40页，共70页，编辑于2022年，星期日 2.2.4 筛选 1、初筛：通风发酵菌种，通过摇瓶发酵进行，每株一瓶 目的：淘汰80%-90%的分离菌株中的低产菌 （1）培养条件：主要通过查阅资料及需要而预先决定：如培养基组成，通风量（装液量，摇瓶机转数），pH、温度、培养时间等。 （2）分析测定：最好定量，如较困难时可采取半定量方法 第41页，共70页，编辑于2022年，星期日 2、复筛：每株3~5瓶，可提前培养种子，使接种量比较一致，3~5%接种量， 培养条件可同初筛 分析测定：定量，注意副产物 复筛可进行多次，逐步淘汰，留下3~5株甚至最好的1株 第42页，共70页，编辑于2022年，星期日 初筛和复筛的比较 第43页，共70页，编辑于2022年，星期日 好氧培养 第44页，共70页，编辑于2022年，星期日 * 2.2.5 复筛高产菌株的分类鉴定 菌体形态特征分析 菌体大小、排列、运动性、产芽孢（孢子）特征、产荚膜？鞭毛、菌丝分枝？染色特征 生理生化特征分析 碳源、氮源、无机盐、生长因子、产酶反应、药物敏感性 遗传特征鉴定 1、G+C（mol%)（差异5%可以认为不同种，10%可以认为不同属, 2、 16s rRNA的基因序列（同源性97%认为同种） 第45页，共70页，编辑于2022年，星期日 * 举例：产PGA芽孢杆菌的鉴定 细胞形态特征 菌体大小 芽孢形状 芽孢着生位置 G+或G-等 第46页，共70页，编辑于2022年，星期日 * 生理生化特征 第47页，共70页，编辑于2022年，星期日 第48页，共70页，编辑于2022年，星期日 第49页，共70页，编辑于2022年，星期日 关