微生物的实验室培养 (6).pptVIP

获得纯净培养物的关键是什么？ 二、无菌技术 防止外来杂菌污染 1. 目的： 2. 方法： 消毒与灭菌 消毒与灭菌的概念和区别？ 第31页，共64页，编辑于2022年，星期日 耐高温需保持干燥的 物品，160～170℃ 1～2小时 接种环、接种针等 金属用具 70~75℃、30min 80℃、15min 100℃、5~6min 消毒 灭菌 定义 方法 较为温和理化方法， 杀死部分有害菌体 （不包括芽孢、孢子） 强烈的理化方法， 杀死所有微生物 （包括芽孢、孢子） 煮沸消毒法 巴氏消毒法 化学药剂 紫外线 灼烧灭菌 干热灭菌 酒精、氯气、石炭酸等 高压蒸汽灭菌 培养基， 100KPa、 121℃、15～30min 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 2.消毒与灭菌： 第32页，共64页，编辑于2022年，星期日 第33页，共64页，编辑于2022年，星期日 高压蒸气灭菌的原理是（ ） A．高压使细菌DNA变性 B．高压使细菌蛋白质凝固变性 C．高温烫死细菌 D．高温使细菌DNA变性 B 第34页，共64页，编辑于2022年，星期日 关于灭菌和消毒的不正确的理解是 A．消毒和灭菌实质上是相同的 B．灭菌是指杀死环境中的一切微生物 的细胞、芽孢和孢子 C．接种环用烧灼的方法灭菌 D．常用灭菌方法有加热法、过滤法、红外线法、化学药品法 A 第35页，共64页，编辑于2022年，星期日 1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 旁栏思考 第36页，共64页，编辑于2022年，星期日 2.无菌范围： 实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 酒精灯旁操作 超净工作台 第37页，共64页，编辑于2022年，星期日 二、微生物实验室培养的基本操作程序 1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存 第38页，共64页，编辑于2022年，星期日 第39页，共64页，编辑于2022年，星期日 涂布器 接种环 接种针 第40页，共64页，编辑于2022年，星期日 第41页，共64页，编辑于2022年，星期日 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml Nacl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 四.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl →琼脂 →补水定容 4.调pH、分装、封口： 5.灭菌： 6.倒平板 7.无菌检查： 37℃培养24-48h 培养基、培养皿 分散成单个细胞, 形成单个菌落 第42页，共64页，编辑于2022年，星期日 倒平板 约50℃ 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基 第43页，共64页，编辑于2022年，星期日 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 问题讨论 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 第44页，共64页，编辑于2022年，星期日 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 第45页，共64页，编辑于2022年，星期日 关于微生物的实验室培养 (6) 第1页，共64页，编辑于2022年，星期日 微生物的类群 微生物 原核类: 真核类 非细胞类：