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* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 第四节 微生物分类鉴定的特征和技术 三、氨基酸的顺序和蛋白质的分析 蛋白质是基因的产物,.蛋白质的氨基酸顺序直接反映mRNA顺序而与编码基因密切相关. 因此,可以通过对某些同源蛋白质氨基酸顺序的比较来分析不同生物系统发育关系,序列相似性越高,其亲缘关系愈近. 因此可以根据蛋白质的氨基酸序列资料构建系统发育树和进行分类. 第62页,共73页,编辑于2022年,星期日 第四节 微生物分类鉴定的特征和技术 四、核酸的碱基组成和分子杂交 比较DNA和碱基组成和进行核酸分子杂交,是目前通过直接比较基因组进行生物分类最常用的两种方法. 1.DNA的碱基组成[(G+C)%] 第63页,共73页,编辑于2022年,星期日 四、核酸的碱基组成和分子杂交 DNA分子含有四种碱基:腺嘌呤、鸟胞嘧啶胸腺.DNA的碱基组成和排列顺序决定生物的遗传性状, 所以DNA碱基组成是各种生物的一个稳定特征.它不受年龄和突变因素以外的外界条件的影响,即使个别基因突变, 碱基组成也不会发生明显变化. 分类学上,用G+C占全部碱基的物质的量百分数(G+C)%来表示各种生物的DNA碱基组成特征. 第64页,共73页,编辑于2022年,星期日 四、核酸的碱基组成和分子杂交 每一种生物都有一定的碱基组成亲缘关系近的生物,它们应该具有相似的G+C含量,若不同的生物之间G+C含量差别大表明它们关系远.现有数据表明: 高等植物的G+C含量范围大约35%~50%之间; 原核生物中G+C含量变化幅度宽达22%~80%; 脊椎动物G+C含量约35%~45%之间; 原核生物中G+C含量变化幅可达22%~80%这也足以表明原核生物是一个极其多样性的类群. 第65页,共73页,编辑于2022年,星期日 四、核酸的碱基组成和分子杂交 目前,虽然还没有一个统一的界定各级分类单元的G+C含量标准,但大量资料表明: 同一个种内的不同菌株G+C含量差别应在4%~5%以下; 同种不同属的差别在10%~15%,通常底于10%. 所以G+C含量已经作为建立新的微生物分类单元的一项基特征,它对于种、属甚至科的鉴定有重要意义. 第66页,共73页,编辑于2022年,星期日 四、核酸的碱基组成和分子杂交 例如,80年代以前螺菌属(Spirillum)不同的G+C含量高达38%~66%,后来伯杰氏手册(1984)结合其他特征已将其分为三个属:螺藻属、海洋螺菌属(Oceanospirillum)和水螺菌属(Aquaspirillum),它们的G+C含量分别为38%、42% ~ 51%和49%~66%; 过去根据形学特征曾认为球菌属(Micrococcus)葡萄球菌属(Staphylococcus)是关系很近的两个属,因而长期放在一个科里,由于G+C含量的差异表明它们的亲缘关系相当远,现在根据16SrDNA序列资料已进行新的调整. 第67页,共73页,编辑于2022年,星期日 四、核酸的碱基组成和分子杂交 然而,值得强调的是: G+C含量的分类学意义主要是作为建立新分类单元的一项基本特征和把那些G+C含量差别大的种类排除出某一分类单元. 测定DNA碱基组成的方法很多,常用的是热变性温度法、浮力密度法和高效液相色普法. 第68页,共73页,编辑于2022年,星期日 四、核酸的碱基组成和分子杂交 2.核酸的分子杂交 生物的遗传信息以(遗传密码)形式线性的排列在DNA分子中,不同DNA碱基排列顺序的异同直接反映这些生物之间亲缘关系的远近,碱基排列顺序差异越小,它们之间的亲缘关系越近,反之亦然。 第69页,共73页,编辑于2022年,星期日 四、核酸的碱基组成和分子杂交 核酸分子杂交在微生物分类鉴定中的应用包括:DNA—DNA杂交、DNA—rDNA杂交以及根据核酸杂交特异性原理制备核酸探针。 (1) DNA—DNA杂交 亲缘关系相对近的微生物之间的亲缘比较 第70页,共73页,编辑于2022年,星期日 四、核酸的碱基组成和分子杂交 (2) DNA—DNA杂交 亲缘关系相对远的微生物之间的亲缘比较 (3)核酸探针 利用特异性的探针,用于细菌等的快速鉴定 第71页,共73页,编辑于2022年,星期日 四、核酸的碱基组成和分子杂交 3.电子杂交 随着微生物基因信息,特别是全基因组完全测序的不断增加,我们可以通过各种计算机软件对不同物种的遗传信息进行直接比较,从而分析不同微生物间的亲缘关系。 第72页,共73页,编辑于2022年,星期日 感谢大家观看 第73页,共73页,编辑于202
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