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弥漫性大B细胞性淋巴瘤中程序性PDL1p53Cmyc的表达及意义（肿瘤学资料） 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：弥漫性大B细胞性淋巴瘤中程序性PDL1p53Cmyc的表达及意义 1 1、材料与方法 2 2、结果 4 3、讨论 5 文2：弥漫性大B细胞淋巴瘤bcl 7 1材料和方法 8 1．2方法 8 参考文摘引言： 12 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 弥漫性大B细胞性淋巴瘤中程序性PDL1p53Cmyc的表达及意义（肿瘤学资料） 文1：弥漫性大B细胞性淋巴瘤中程序性PDL1p53Cmyc的表达及意义 弥漫性大B细胞性淋巴瘤是最常见的侵袭性非霍奇金淋巴瘤，CD20单抗美罗华的应用显著改善了疾病预后，但仍有30%～40%的患者因原发性耐药或复发而死亡[1]。免疫靶点治疗在现阶段多种肿瘤治疗中取得了重要进展，有研究证实程序性死亡因子-1(programmeddeath-1，PD-1)及其配体-1(programmeddeath-ligand1，PD-L1)信号通路在DLBCL的发病中起重要作用，PD-L1可能是DLBCL的一个免疫检查点[2]。p53和C-myc是抑癌基因TP53和原癌基因MYC在蛋白水平的表达，二者直接或间接参与了PD-1/PD-L1通路作用机制[2]。本实验旨在通过免疫组化方法检测DLBCL组织中PD-L1、p53和C-myc的表达水平，并分析三者表达与弥漫性大B细胞性淋巴瘤患者临床病理特征及其相互之间的关系，为DLBCL临床免疫治疗的探索及疾病预后判断提供有价值的信息。 1、材料与方法 材料 收集2014-02—2018-12间华北理工大学附属医院病理科确诊为DLBCL的石蜡标本50例，诊断标准参照WHO(2017)造血与淋巴组织肿瘤分类[3]，所有病例术前均未行化疗和放疗，临床病例资料完整。其中男性28例，女性22例;年龄23～85岁，中位年龄61岁。非特殊类型弥漫性大B细胞性淋巴瘤44例，原发中枢神经系统的弥漫性大B细胞性淋巴瘤(CDLBCL)2例，原发皮肤弥漫性大B细胞性淋巴瘤，腿型(PCLBCL)1例，原发纵隔(胸腺)大B细胞性淋巴瘤1例，EB病毒阳性弥漫性大B细胞性淋巴瘤，非特指型2例。按Ha分型法:生发中心B细胞样型33例，非生发中心B细胞样型17例。 方法 所有标本经4%中性甲醛固定、常规石蜡包埋，4μm厚连续切片，行免疫组化EnVision法染色。所用抗体PD-L1(克隆号SP263)单克隆抗体购于瑞士Roche公司，鼠抗人p53(克隆号ZM-0408)和C-myc(克隆号ZA-0555)单克隆抗体均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。EnVision免疫组化试剂盒、生物素标记二抗工作液和辣根酶标记链霉卵白素工作液等均由华北理工大学附属肿瘤医院病理科提供。用PBS液代替一抗作为阴性对照，操作按试剂盒说明书进行。 MYC、BCL2、BCL6基因断裂探针试剂盒购于武汉康录生物公司。4μm石蜡切片经脱蜡通透至水，蛋白酶37℃消化10min，梯度乙醇脱水干燥。暗室中滴加探针，盖玻片橡皮胶封边，85℃共变性5min，42℃杂交8h;取出玻片，去除橡皮胶，2×SSC液洗涤并用镊子轻轻将盖薄片揭去;室温2×SSC洗涤1min，68℃%NP-40/×SSC溶液洗涤2min，37℃去离子水浸泡1min，暗处自然干燥玻片。DAPI复染，封片镜检。 结果判定 (1)免疫组化结果:PD-L1阳性染色定位于细胞膜，为黄色或棕黄色，当任何着色强度的肿瘤细胞≥25%时定义为阳性[4]。p53、C-myc阳性染色均定位于细胞核，为黄色或棕黄色，当p53着色肿瘤细胞≥50%、C-myc着色肿瘤细胞≥40%时定义为阳性。(2)FISH结果:红色信号代表5’端信号，绿色信号代表3’端信号。2个黄色融合信号(2F)为阴性细胞，1红1绿1融合(1R1G1F)或2红2绿信号(2R2G)为阳性细胞。随机计数200个细胞，每个细胞计数1次，只计数有杂交信号的细胞(两种颜色信号均有)。1R1G1F信号和2R2G信号15%为阳性;1R1G1F信号和2R2G信号15%为阴性;阳性细胞的比例=15%时，加大计数数目或分析整张片子;若仍≤15%则判读为阴性，否则为阳性。 统计学分析 应用软件进行统计学分析，组间比较均采用χ2检验和Fisher确切概率法，相关性分析采用Spearman秩相关分析。 2、结果 、p53和C-myc的表达 50例DLBCL标本中，PD-L1、p53及C-myc的阳性率分别为42%(21/50)、18%(9/50)和14%(7/50)(表1，图1～3) 图1在DLBCL细胞胞膜中PD-L1(+)