《食品微生物学检验》课件 4-1 菌落总数测定.pptVIP

第二章 食品微生物检验基本技术 * 食品微生物学检验菌落总数测定浙江工商大学 赵广英 GB 4789.2 * 食品安全国家标准 食品微生物学检验:菌落总数测定 National food safety standard Food microbiological examination：Aerobic plate count 2016-12-23 发布 2017-06-23 实施 * 内容 安排 前言 1、范围 2、术语和定义、 3、设备和材料 4、培养基和试剂 5、检验程序及其解释 6、操作步骤 其它 课时：1.5 重点：检验程序对 应的机理 难点：机理和程序 * 前 言 本标准代替GB4789. 2—2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》。 1 范围 本标准规定了食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定方法。 本标准适用于食品中菌落总数的测定。 * 2 术语和定义 2.1 菌落总数 aerobic plate count 食品检样经过处理，在一定条件下（如平板计数培养基、 36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。水产品30 ℃培养72 h±3 h）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。表示方法：CFU/g、 CFU/mL。 结果比食品实际污染的全部细菌数少，因为在此条件下不能长出可见菌落的菌种就数不出来。 * 用途和意义（补） （1）菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，特别是已属于直接供食用的制成食品中的菌落总数； （2）观察细菌在食品中繁殖的动态消长情况，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据； （3）评定食品杀菌消毒效果。 * 3 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。 3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 3.4 天平：感量为0.1 g。 3.5 均质器。 3.6 振荡器。 3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。 3.9 无菌培养皿：直径90 mm。 3.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。 3.11 放大镜或/和菌落计数器。 * 4 培养基和试剂 4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。 4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.2。 4.3 无菌生理盐水：见附录A 中A.3 * 46 ℃的 36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h。水产品30 ℃±1 ℃培养72 h±3 h。 选取菌落数在30 CFU～300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。 按照一定的计算公式 和计算方法计算 5 检验程序 菌落总数的检验程序见图1。 有报告方法； CFU/g或CFU/mL表示 每个稀释度做2个平皿；设2个空白对照；每份样品计6-8个平板 * 6 操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8 000 r/min～10 000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。 * 6.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 6.1.4 按6.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。 6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2 个～3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10 倍递增稀释时，吸取1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。 6.1.6 及时将15 mL～20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾