《食品微生物学检验》课件 7 致泻大肠埃希氏菌检验.pptVIP

6. 5. 5 PCR循环条件：预变性94℃5mi n;变性94℃30s,复性63℃30s,延伸72℃ 1. 5mi n, 30个 循环; 72℃延伸5mi n。将配制完成的PCR反应管放入PCR仪中,核查PCR反应条件正确后,启动反 应程序。 6. 5. 6 凝胶电泳：琼脂糖+溴化乙锭（EB）电泳，成像仪中观察结果，拍照并记录。 6. 5. 7 结果判定。电泳结果中空白对照应无条带出现；阴性对照仅有 uidA条带扩增；阳性对照中出现所有目标条带；PCR试验结果成立。根据电泳图中目标条带大小,判断目标条带的种类,记录每个泳道中目标条带的种类,在表5中查找不同目标条带种类及组合所对应的致泻大肠埃希氏菌类别。 6. 5. 8 PCR试剂盒：如用商品化PCR试剂盒或多重聚合酶链反应(MPCR)试剂盒,应按照试剂盒说明书进行操作和 结果判定。 * 6. 6 血清学试验(选做项目) 6. 6. 1 取PCR试验确认为致泻大肠埃希氏菌的菌株进行血清学试验。 6. 6. 2 O抗原鉴定 ：凝集实验 （用多管）假定试验和单管证实试验：用多价O抗血清做玻片凝集试验。当与某一种 多价O抗血清凝集时,再与该多价血清所包含的单价O抗血清做凝集试验。 表6 致泻大肠埃希氏菌主要的O抗原 * 6. 6. 3 H抗原鉴定：玻片凝集或试管凝 集试验 6. 6. 3. 1 取菌株穿刺接种半固体琼脂管, 36℃±1℃培养18h~24h,取顶部培养物1环接种至BHI 液体培养基中,于36℃±1℃培养18h~24h。加入福尔马林至终浓度为0. 5%,做玻片凝集或试管凝 集试验。 6. 6. 3. 2 若待测抗原与血清均无明显凝集,应从首次穿刺培养管中挑取培养物,再进行2次~3次半固 体管穿刺培养,按照 进行。 * 7 结果报告 7. 1 根据生化试验、 PCR确认试验的结果,报告25g(或25mL)样品中检出或未检出某类致泻大肠埃 希氏菌。 7. 2 如果进行血清学试验,根据血清学试验的结果,报告25g(或25mL)样品中检出的某类致泻大肠 埃希氏菌血清型别。 * 复习题 1、Escherichia. coli ; ETEC; EHEC; EIEC，EPEC，STEC， EAEC 2、 Escherichia. Coli 在麦康凯琼脂和伊红美蓝琼脂上的典型菌落的特点？ 3、三糖铁琼脂(TSl)的主要成分？含量？所检测项目及其原理？ 4、理解致病性大肠埃希氏菌检验程序及其各步骤原理。 5、甲(α)型溶血：有草绿色溶血环； 乙(β)型溶血：呈透明溶血环。 6、大肠埃希氏菌(Escherichia.coli; E.coli ）是人类和动物肠道中正常菌群的主要成员，粪便约含109个/g。按对宿主有无致病性将E.coli分为哪三类？有益生菌、条件致病菌和致病菌三类。依据致病性不同将致泻性大肠埃希氏菌分为哪5类？ 7、 致泻E.coli 耐热肠毒素(ST)可耐受的温度和时间？ 8、 E.coli在麦康凯琼脂和伊红美蓝琼脂培养基上的菌落特征？ 9、理解致泻大肠埃希氏菌的检验程序。 * * 第四章：肠道致病杆菌检验 致泻大肠埃希氏菌检验 1 * 2016-12-23公布 2017-6-23实施 2 GB 4789.6-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 致泻大肠埃希氏菌 National food safety standard Food microbiological examination Examination of Diarrheagenic Escherichia coli * 第一部分 前言 1.概述 2.生物学特性 3.致病性 6 第二部分 GB 4.培养基和试剂 5.检验程序 6.毒素检测 7.快速检测 * 1. 概述 大肠埃希氏菌(Escherichia.coli; E.coli)，俗称大肠杆菌，是人类和动物肠道中正常菌群的主要成员，粪便约含109个/g。有益生菌、条件致病菌和致病菌三类。E.coli 随粪便排出后，广泛分布于自然界。水、牛乳及其他食品或物品一旦检出大肠埃希氏菌，即意味着这些物品直接或间接被粪便污染。 /showimg.php?q=E.colipg=1tp=0pid=5 7 * 2. 生物学特性 1) 形态与染色 2) 培养特性 3) 生化特性 4）抵抗力 5）抗原性与分类 9 * 1) 形态与染色 G－、有鞭毛和菌毛、无芽孢或有荚膜，两端钝中小圆短杆菌。 大小为(1.1－1.5) μm X (2.0－ 6.