第五章种子制备.pptVIP

一、实验室种子制备 1、 培养物选择的原则 目的:种子扩培到一定的量和质,依照菌种的特点最终的培养物可分为两类： 1、不产孢子和芽胞的微生物 ——获得一定数量和质量的菌体 2.产孢子的 ——获得一定数量和质量的孢子 ——获得一定数量和质量的菌体 放线菌孢子的制备 1、培养基与培养条件 (1)琼脂,和其他营养成分如麸皮、豌豆浸汁、蛋白胨、牛肉膏和一些无机盐等，碳源和氮源不要太丰富，碳氮比例大一些为好，干燥和限制营养可直截了当或间接诱导孢子的形成。 （2）多为28℃，部分为30℃或37℃。一般在4～7d，也有的为14d左右。 2.流程 砂土管冷冻管 母斜面 孢子悬浮液 孢子悬浮液 种子罐 子斜面 霉菌孢子的制备 1、培养基与培养条件 (1)多数采纳大米、小米、玉米、麦麸等天然农产品,来源丰富 ，适合霉菌的生长繁殖，表面积较大 。制备大（小）米培养基，严格控制含水量，使其不粘不散。 （2）25℃～28℃，培养时间随菌种而不同，一般为4～14d。为了使通气均匀，要注意翻动。 2.流程 砂土管冷冻管 菌悬液 大（小）米培养基 “亲米” 琼脂斜面 孢子悬浮液 大（小）米培养基 “生产米” 种子罐 细菌孢子的制备 1、培养基与培养条件 (1)采纳碳源限量而氮源丰富的配方。牛肉膏、蛋白胨是常用的有机氮源。 （2）细菌培养温度大多数为37℃,少数为28℃。细菌菌体培养时间一般为1～2d，产芽孢的细菌则需培养5～10d。 2.流程 冷冻管 砂土管 种子罐 斜面F1（第1代） 斜面F2（第2代） Fn（n代 ) 2、培养基选择的原则 培养基的选择应该是有利于菌体的生长,对孢子培养基应该是有利于孢子的生长。 在原料方面,实验室种子培养时期，规模一般比较小，因此为了保证培养基的质量，培养基的原料一般都比较精细。 3、起始接种物的传代问题 细菌和酵母 保藏斜面 → 活化斜面 产孢子 保藏 → 母斜面 → 子斜面 目的:使菌种的传代次数尽估计的少。 母瓶:活化、纯化,使保藏菌种生长，并去除变异株。因此接种时要稀一点、便于纯化生长到单菌落。 子瓶: 大量繁殖,得到大量孢子。 接种:①从母斜面上点接种，选取生长好的单菌落。 ②接种时密一点，得到大量的孢子。 孢子培养时注意湿度,子斜面使用一般不超过1个月 孢子培养过程 二、生产车间时期 1、培养物的选择原则 最终一般都是获得一定数量的菌丝体。 (1)缩短发酵时间 (2)有利于获得好的发酵结果 菌丝体比孢子要有利: 2、培养基选择的原则 目的:获得一定数量和质量的菌体,因此培养基的选择应首先考虑的是有利于孢子的发育和菌体的生长，因此营养要比发酵培养基丰富。 在原料方面:不如实验室时期那么精细,而是本接近于发酵培养基，这有两个方面的原因: 一是成本 二是驯化 例:柠檬酸发酵 1、以蔗糖为原料 成分 斜面 种子罐 发酵 麦芽汁 麦汁 蔗糖 2、5-5% 20% NH4NO3 0.225% 0.11% K2HPO4 0.03% MgSO4.H2O 0.025% 0.025% KCl 0.015% 琼脂 2% 2、薯干粉 成分 斜面 种子罐 发酵 麦芽汁 麦汁 薯干粉 10% 22-28% (NH4)2SO4 0、5% 琼脂 2% 3、种子罐级数的确定