第六章微生物的生长繁殖及其控制.pptxVIP

第六章微生物的生长繁殖及其控制6、1 细菌个体生长一、物质的复制－DNA1、 在细菌个体生长过程中,DNA以双向的方式进行复制、2、 生长迅速的细菌中,新产生的子细胞中已　　　 经有复制着的染色体DNA,即DNA复制与　 　　　 细胞分裂并非同步。二、细胞壁的扩增1、 球形菌的细胞壁扩增方式:在赤道板附近插入;2、 杆形菌的细胞壁扩增方式:新老细胞壁间隔分布;3、 细胞壁扩增的分子基础:短肽中第三位双氨基氨基酸的作用。G＋菌:L－赖氨酸;G－菌:二氨基庚二酸4、 作用于细胞壁的酶: 作用于双糖单位的:N－乙酰葡萄糖胺酶和N－乙酰胞壁酸酰胺酶肽聚糖短肽链的:转肽酶、内肽酶和羧肽酶三、细菌生长与分裂调节各种物质复制后,质膜内陷伴随新肽聚糖插入,导致 横隔壁向心生长,最后会合,一分为二。 对细菌生长与分裂起调节作用的主要是于转肽酶和D,D－羧肽酶活性比。 转肽酶活性高些,利于CW扩增,导致细菌生长。 羧肽酶高些,利于横隔壁形成,导致细胞分裂。6、2微生物生长的测定 评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响;微生物生长评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制(或杀死)作用的效果;客观地反映微生物生长的规律;直接计数法个体计数间接计数法微生物生长的测定方法 生物量测定:重量测定、生理指标测定个体计数法通常用来测定细菌、酵母菌等单细胞微生物的生长情况或样品中所含微生物个体的数量; 1mm225（16）中格16（ 25 ）小格，共400小格1、个体计数法A、直截了当法利用血球计数板,在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 缺点:不适于对运动细菌的计数;需要相对高的细菌浓度;个体小的细菌在显微镜下难以观察;25X16型血球计数板B、简接法原理是每个活细菌在适宜的培养基和良好的生长条件下能够通过生长形成菌落。 稀释平板计数法 先将待测菌液作一系列10倍稀释,使平皿上长出的菌落数在30-300个之间→ 单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖 → 肉眼可见的菌落 → 对菌落数目的计数推测样品中的微生物细胞数 稀释平板计数法涂布平板法 使用较多的常规方法,但有时涂布不均匀！(一般0、2ml)样品充分混匀;要求:每支移液管及涂布棒只能接触一个 稀释度的菌液; 同一稀释度三个以上重复,取平均值; 每个平板上的菌落数目合适,便于 准确计数; 每ml活菌数＝同一稀释度平均数×稀释倍数×5 注意:要三个以上重复平板平均计数;不适合丝状菌平板计数法C、 比浊法 在一定波长下,测定菌悬液的光密度,以光密度 (optical density, 即O、D、)表示菌量。 注意: 测量应在菌浓度与O、D、成正比的线性范围内,否则不准2、重量法测定多细胞及丝状真菌生长情况的有效方法。以干重(105℃)、湿重直截了当衡量微生物群体的生物量;通过样品中蛋白质、核酸含量的测定间接推算微生物群体的生物量;蛋白质含量测定法从一定量培养物中分离出细菌,洗涤,以除去培养基带入的含氮物质。再用凯氏定氮法法测定总含氮量。一般细菌的含氮量约为原生质干重的14%。故,蛋白质总量=含氮量%×6、25蛋白质含量占细菌总重的～65％,故细胞总量＝蛋白质总量×1、54DNA含量测定法:利用DNA与DABA-2HCl(即新配制的20%W/W,3,5-二氨基苯甲酸-盐酸溶液)能显示特别荧光反应的原理而设计的。因为每个细菌平均含DNA8、4×10-5纳克,可依照DNA含量计算出细菌的数量。3、生理指标测定法微生物的生理指标,如呼吸强度,耗氧量、酶活性、生物热等与其群体的规模成正相关。样品中微生物数量多或生长旺盛,这些指标愈明显,因此能够借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量热计等设备来测定相应的指标。常用于对微生物的快速鉴定与检测6、3 细菌群体的生长繁殖研究细菌群体培养的原因:由于个体微小;微生物接种是群体接种,接种后的生长是微生物的群体繁殖生长。一、细菌群体的生长规律生长曲线:细菌接种到定量的液体培养基中,定时取样测定细胞数量,以培养时间为横座标,以菌数为纵座标作图,得到的一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线。曲线特征:依照微生物每小时的分裂代数(R)不同,一般可把生长曲线分成迟缓期(延滞期)、对数生长期、稳定期、衰亡期。　　1、 迟缓期(lag phase)　定义:少量微生物接种到新鲜培养基,开始的一段时间内数目不增加的时期。特点:生长速率常数等于零。细胞形态变大或增长(巨大芽孢杆菌　接种3、4μm,培养5、5小时,19、8μm)胞内RNA尤其是rRNA含量增高;合成代谢活跃(核糖体、酶类、ATP合成加快)。对外界不良条件(氯化钠浓度、温度)抗生素等反应敏感。延迟期出现的原因:估计是为了调整代谢。当细胞接种到新的环境(如从固体培养接种至液体培养基)后,需要重新合成必需量的酶、