蛋白质的理化性质.pdfVIP

第四节 蛋白质的理化性质 一、两性离解和等电点 蛋白质是由氨基酸组成的，在其分子表面带有很多可解离基团，如 羧基、氨基、酚羟基、咪唑基、胍基等。此外，在肽链两端还有游离的α -氨基和α-羧基，因此蛋白质是两性电解质，可以与酸或碱相互作用。溶 液中蛋白质的带电状况与其所处环境的pH 有关。当溶液在某一特定的pH 条件下，蛋白质分子所带的正电荷数与负电荷数相等，即净电荷数为零， 此时蛋白质分子在电场中不移动，这时溶液的pH 称为该蛋白质的等电点， 此时蛋白质的溶解度最小。由于不同蛋白质的氨基酸组成不同，所以蛋白 质都有其特定的等电点，在同一pH 条件下所带净电荷数不同。如果蛋白 质中碱性氨基酸较多，则等电点偏碱，如果酸性氨基酸较多，等电点偏酸。 酸碱氨基酸比例相近的蛋白质其等电点大多为中性偏酸，约在5.0 左右。 1、两性解离 蛋白质可以在酸性环境中与酸中和成盐，而游离成正离子，即蛋 白质分子带正电，在电场中向阴极移动；在碱性环境中与碱中和成盐 而游离成负离子，即蛋白质分子带负电，在电场中向阳极移动。以“ P” 代表蛋白质分子， 以―NH 和―COOH 分别代表其碱性和酸性解离基团， 2 随pH变化，蛋白质的解离反应可简示如下： NH+ NH+ NH 3 3 2 P P P COOH COO- COO- 蛋白质的阳离子 蛋白质的兼性离子（等电点） 蛋白质的阴离子 （pHpI） （pH=pI ） （pHpI） 移向阳极 不移动 移向阴极 2、等电点沉淀和电泳 ①等电点沉淀 蛋白质在等电点时，以两性离子的形式存在，其总电荷数为零， 这样的蛋白质颗粒在溶液中因为没有相同电荷而相互排斥的影响，所 以极易借静电引力迅速结合成较大的聚集体，因而易发生沉淀析出。 这一性质常在蛋白质分离、提纯时应用。在等电点时，除了蛋白质的 溶解度最小外，其导电性、粘度、渗透压以及膨胀性均为最小。 ②电泳 蛋白质颗粒在溶液中解离成带电的颗粒，在直流电场中向其所带 电荷相反的电极移动。这种大分子化合物在电场中定向移动的现象称 为电泳。蛋白质电泳的方向、速度主要决定于其所带电荷的正负性， 电荷数以及分子颗粒的大小。 蛋白质混合液中，各种蛋白质的分子量不同，因而在电场中移动 的方向和速度也各不相同。根据这一原理，就可以从混合液将各种蛋 白质分离开来。因此电泳法通常用于实验室、生产或临床诊断来分析 分离蛋白质混合物或作为蛋白质纯度鉴定的手段。 如将蛋白质溶液点在浸了缓冲液的支持物上进行电泳，不同组分 形成带状区域，称为区带电泳。其中用滤纸做支持物的称纸上电泳 （如 下图）。这种方法比较简便，为一般实验室所采用。近年来，用醋酸纤 维薄膜作支持物进行电泳，速度快，分析效果好，定量比较准确，已 逐渐取代纸上电泳。 清蛋白 α― α― β― γ―球 1 2 (+) 原 (-) 点 图 我国正常人血清蛋白质纸上电泳图 二、胶体性质 由于蛋