《《免疫学实验》》课程教学大纲（本科）.docxVIP

PAGE6 / NUMPAGES6 《免疫学实验》 （Immunology Experiment） 课程代码 学分：0.5 学时：16 先修课程：生物化学、微生物学、细胞生物学 适用专业：生物技术 教材或实验指导书：（选填） 一、课程性质与课程目标 （一）课程性质（需说明课程对人才培养方面的贡献） 免疫学是相关专业培养计划中的一门专业方向课，它建立在生物化学、微生物学等学科的知识基础上，目的在于提升生物技术专业学生的专业理论知识水平和提高学生分析与解决相关领域实际问题的能力。 免疫学实验课程的性质为：通过本课程的学习与操作，让学生在较短时间内掌握免疫沉淀，免疫凝集，免疫细胞分离、血型鉴定等基本的免疫学实验技能，为进一步从事免疫学相关的研究和工作奠定基础。 （二）、课程目标 1．课程目标1：通过免疫细胞分离实验，使学生掌握分离血细胞的实验技能，并学会区分、分析我们机体中免疫细胞的种类和特点。 2．课程目标2：通过免疫沉淀，免疫凝集，血型鉴定等实验，使学生更好地理解不同抗原、抗体之间的反应，并理解抗原抗体反应监测在生物学诊断中的作用和意义，达到使学生掌握基本抗原抗体反应的操作技能，为其毕业后的工作和研究奠定良好的基础。 （三）课程目标与专业毕业要求指标点的对应关系 1. 毕业要求2：具有运用从事生物技术及相关工作所需的自然科学知识的要求。 2. 毕业要求3：有现代生物科学与技术的基本理论知识，具有系统的实验技能学习与训练经历。 3. 毕业要求5：具有追求创新的态度和意识，掌握生物技术领域的基本创新方法，并能够综合考虑安全、健康、伦理等制约因素 课程目标 毕业要求指标点 课程目标1 课程目标2 毕业要求2 √ √ 毕业要求3 √ √ 毕业要求5 √ 注：课程目标与毕业要求指标点对接的单元格中可输入“?”，也可标注“H、M、L”。 二、本课程开设的实验项目 编号 实验项目名称 学时 类型 要求 支撑的课程目标 1 免疫细胞的分离与观察 4 验证 必做 课程目标1 2 免疫扩散实验 4 验证 必做 课程目标2 3 免疫凝集实验 4 验证 必做 课程目标2 4 血型测定实验 4 综合 必做 课程目标2 注：1.类型指验证性、综合性、设计性等。 2.要求指必做、选做。 实验1. 免疫细胞的分离与观察 （1）相关原理：血中有大量不同种类的免疫细胞： ①红细胞（运输氧气）， 有粒细胞（嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞）②血小板（凝血作用） 有粒细胞（嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞） 无粒细胞（单核细胞 、淋巴细胞）③ 无粒细胞（单核细胞 、淋巴细胞） （2）操作流程：采血 推片 初染色 再染色 漂洗 干燥 染色 镜检 ①采血：菜市场买一只青年鸡，先用酒精棉球对翅膀内侧采血部位进行消毒，然后用无菌注射器（1ml)采血，每组1人拿载玻片迅速取1滴血 ②推片：每组另1人取一盖玻片，以其一端放在血滴前方并接触血滴，30度向血滴 相反的方向移 动，形成血膜。 ③ 初染色：加3-5滴瑞氏-吉姆萨染色液覆盖血膜1分钟左右 ④再染色：取与瑞氏-吉姆萨染色液同体积的PBS滴加在血涂片上，以嘴或洗耳球吹出微风使液面产生涟漪状，使两液充分混合，染色20-30分钟。 ⑤漂洗：用PBS缓慢从玻片一端温和冲洗至血膜呈淡红色(注意勿先倒去染液或直接对血膜冲洗) ⑥干燥：把血涂片立起自然晾干 ⑦镜检：依次在低倍镜、高倍镜下观察不同种类的血细胞 （3）设备：显微镜、冰箱 （4）结果分析： ① 绘制显微镜下你所观察到的不同种类的血细胞 。 ② 简单描述几种不同类型血细胞的功能。 实验2. 免疫扩散实验 （1）相关原理：当可溶性抗原（蛋白质、多糖等）与相应的抗体，在电解质的凝胶介质中扩散一段时间后，抗原和抗体相遇形成复合物，若抗原抗体比例适宜，会形成肉眼可见的白色或乳白色沉淀线。这种反应称为免疫扩散。 （2）操作流程：制板 打孔 封底 加样 感作 观察结果 ①制板：将0.5g的琼脂粉加入到50ml pH=7.2的含有8%氯化钠0.01mol磷酸盐缓冲液中，水浴加热至溶化。待冷却至60℃-65℃后倒入到一个无菌平皿中（高度约为3mm），凝固后备用。 ②打孔：待琼脂凝固后，按七孔梅花瓣图形（图1）进行打孔，用白色枪头挑去孔内琼脂 。 ③封底：用酒精灯轻烤平皿底部致微烫，封闭孔底部，防止侧漏。 ④加样： 用移液器将标准法氏囊抗原或标准法氏囊抗体放入中间孔（加满但勿溢出），其余边上孔分别加满不同稀释度的标准法氏囊抗体和PBS及蒸馏水对照。