第九章 维生素测定 第二节 脂溶性维生素的测定.pptVIP

4.3 样品测定: 于一比色管中加入10ml三氯甲烷，加入一滴乙酸酐为空白液。 另一比色管中加入1ml样品溶液及1滴乙酸酐。其余步骤同标准曲线的制备。  注意： 1、维生素A见光易分解，整个实验应在暗处进行，防止阳光照射，或采用棕色玻璃避光。 2、三氯化锑腐蚀性强，不能沾在手上，三氯化锑遇水生成白色沉淀．因此用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再清洗。 说明： １本法为国家标准方法，适用于食品中维生素Ａ的测定。 ２乙醚为溶剂的萃取体系，易发生乳化现象，在提取前，洗涤操作中，不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇消除乳化。 ３所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现深沉，干扰比色测定。故在每1mL氯仿中应加入乙酸酐１滴，以保证脱水。 ４由于三氯化锑与维生素Ａ所产生的蓝色物质很不稳定，通常6s以后便开始褪色，因此要求反应在比色皿中进行，产生蓝色后立即读取吸光度值。 ５如果样品中含β－胡萝卜素（如奶粉、禽蛋等食品）干扰测定，可将浓缩蒸干的样品用正己烷溶解，以氧化铝为吸附剂，丙酮－己烷混合液为洗脱剂进行柱层析。 ６三氯化锑腐蚀性强，不能沾在手上，三氯化锑遇水生成白色深沉，因此用过的仪器要先用稀盐酸浸泡后再进行清洗。 三、β—胡萝卜素的测定 胡萝卜素是一种广泛存在于有色蔬菜和水果中的天然色素，有多种异构体和衍生物，总称为类胡萝卜素，其中在分子结构中含有 β一紫罗宁残基的类胡萝卜素，在人体内可转变为维生素A，故称为维生素A原。如α、β、γ胡萝卜素，其中以β—胡萝卜素效价最高。 胡萝卜素原只存在于植物性食品中，但以含有胡萝卜为食物的家禽、兽类、水产动物及其加工产品，以及为着色而添加胡萝卜素的食品，当然也含有胡萝卜素。 β—胡萝卜素的结构如下： 胡萝卜素对热及酸、碱比较稳定，但紫外线和空气中的氧可促进其氧化破坏。因系脂溶性维生素，故可用有机溶剂从食物中提取。 胡萝卜素本身是一种色素，在450 nm 波长处有最大吸收，故只要能完全分离，便可定性和定量。但在植物体内，胡萝卜素经常与叶绿素、叶黄素等共存，在提取 β一胡萝卜素时，这些色素也能被有机溶剂提取，因此在测定前，必须将胡萝卜素与其它色素分开。常用的方法有纸层析、柱层析和薄层层析法。 （GB/T 5009.83—2003 ）第一方法是HPLC； 第二方法为纸层析法。 试样经过皂化后，用石油醚提取食品中的胡萝卜素及其他植物色素，以石油醚为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极性最小，移动速度最快，从而与其他色素分离。剪下含胡萝卜素的区带，洗脱后于450 nm波长下定量测定。 注意事项： (1) 纸层析法简便，色带清晰，最小检出量为0.11μg。 (2)样品和标准液的提取一定要注意避免丢失。 (3)浓缩提取液时，一定要防止蒸干，避免胡萝卜素在空气中氧化或因高温、紫外线直射等破坏。 (4)定容、点样、层析后剪样点等操作环节一定要迅速。 四、维生素D的测定 维生素D为一组存在于动植物组织中的类固醇的衍生物，因其有抗佝偻病作用，也称之为抗佝偻病维生素。具有维生素D活性的化合物约有10种，其中最重要的是维生素D2、维生素D 3及其维生素D原。维生素D 2无天然存在，维生素D2只存在于某些动物性食物中。但它们都可由维生素D原(麦角固醇和7一脱氢胆固醇)经紫外线照射形成。 维生素D2 药片吃多了中毒。 分析方法中较好的是比色法和高效液相色谱法。 是AOAC选定的正式方法。 (一)三氯化锑比色法 (二) 液相色谱法 它的的灵敏度较比色法高30倍以上，且操作简便，精度高，分析速度快。是目前分析维生素D的最好方法。 　　　三氯化锑比色法　　　　　　　　　 原理： 在三氯甲烷溶液中，维生素D与三氯化锑结合生成一种橙黄色化合物，呈色强度与维生素D的含量成正比。 操作步骤： １样品处理：皂化与提取步骤同维生素Ａ的测定。如果样品中有维生素Ａ共存，可用以下方法进行分离纯化。 Ａ分离柱的制备。取一支内径为2.2cm，具有活塞和砂芯板的玻璃层析柱。 第一层：加入1-2g无水硫酸钠，铺平整。 第二层：称取15g白色硅藻土celite545置于250mL碘价瓶，加入80mL石油醚，振摇2min，再加入10mL聚乙二醇600，剧烈振摇10min，使其黏合均匀，然后倾入层析柱内。 第三层：加5g中性氧化铝。 第四层：加入２－４g无水硫酸钠。 轻轻地转动层析柱，使第二层的高度保持在12左右。 Ｂ纯化 　　　先用30-50mL石油醚淋洗分离柱，然后将样品提取液倒入柱内，再用石油醚继续淋洗。弃去10mL最初收集的滤液，再用200mL容