第九章 维生素测定 第三节 水溶性维生素的测定.pptVIP

8、干扰滴量因素： a若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色，或加1mL氯仿，到达终点时，氯仿层呈现淡红色。 bFe2+可还原二氯靛酚。对含大量Fe2+的样品可用8%乙酸溶液代替草酸溶液提取，此时Fe2+不会很快与染料起作用。 c样品中可能有其他杂质还原二氯靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一滴一滴地加入，并要不断摇动三角瓶直至呈粉红色，于15s内不消退为终点。 d提取的浆状物如不易过滤，留取上清液进行滴定。 (二) 2，4—二硝基苯肼比色法 GB/T 5009.86—2003 《蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸含量测定方法》第二法总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮基古洛糖酸。样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2,4-二硝基苯肼作用生成红色的脎，根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色定量。 (三)荧光法 GB/T 5009.86—2003 第一法 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸后，与邻苯二胺 (OPDA) 反应生成有荧光的喹喔啉。其荧光强度与抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食品中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与 OPDA 反应，以此排除样品中荧光杂质产生的干扰。 重点 维生素的分类。 VA 、VC 的测定方法。 第三节 水溶性维生素的测定 一、维生素Bl的测定 二、维生素B2的测定 三、维生素C的测定 目的：掌握水溶性维生素测定方法原理和注意事项等要点。 水溶性维生素B1、B2和C，广泛存在于动植物组织中，饮食来源充足。但是由于它们本身的水溶性质，除满足人体生理、生化作用外，任何多余量都会从小便中排出。为避免耗尽，需要经常地由饮食来提供。 水溶性维生素都易溶于水，而不溶于苯、乙醚、氯仿等大多数有机溶剂。在酸性介质中很稳定，既使加热也不破坏；但在碱性介质中不稳定，易于分解，持别在碱性条件下加热，可大部或全部破坏。它们易受空气、光、热、酶、金属离子等的影响； 维生素B2对光，特别是紫外线敏感，易被光线破坏； 维生素C对氧、铜离子敏感，易被氧化。 根据上述性质，测定水溶性维生素时，一般都在酸性溶液中进行前处理。 维生素Bl、B2 盐酸水解 酶解 提取 纯化 维生素C通常采用草酸、草酸—醋酸、偏磷酸—醋酸溶液直接提取。在一定浓度的酸性介质中，可以消除某些还原性杂质对维生素C的破坏作用。 淀粉酶、 木瓜蛋白酶 活性人造浮石、 硅镁吸附剂 一、维生素Bl的测定 维生素Bl又名硫胺素、抗神经炎素，通常以游离态，或以焦磷酸酯形式存在于自然界。在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色蔬菜和牛乳、蛋黄中含量较为丰富。 分析方法：GB/T 5009.84—2003中唯一的方法是荧光计法。 样品经热稀酸处理，以提取维生素B1。如果所含维生素B1为游离态，可直接在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素（硫色素），在紫外线照射下，噻嘧色素发出荧光。在给定的条件下，以及没有其他荧光物质干扰时，此荧光之强度与噻嘧色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。 硫胺素 硫色素 注意事项： (1)一般食品中维生素B1有游离型的，也有结合型，需用酸和酶水解，使结合型B1成为游离型，再采用此法测定。 (2)硫色素能溶解于正丁醇，在正丁醇中比在水中稳定，故用正丁醇等提取硫色素。萃取时振摇不宜过猛，以免乳化，不易分层。 (3)紫外线破坏硫色素，所以硫色素形成后要迅速测定，并力求避光操作。 (4)用甘油-淀粉润滑剂代替凡士林涂盐基交换管下活塞，因凡士林具有荧光。 (5)谷类物质不需酶分解，样品粉碎后用25％酸性氯化钾直接提取，氧化测定。 二、维生素B2的测定 维生素B2即核黄素。在食品中以游离形式或磷酸酯等结合形式存在。膳食中的主要来源是各种动物性食品，其中以肝、肾、心、蛋、奶含量最多，其次是植物性食品的豆类和新鲜绿叶蔬菜。 分析方法： GB/T 5009.85—2003中第一法为荧光法。 第二法为微生物法。 硅镁吸附剂净化荧光法 ： 核黄素在440～500 nm波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光强度与核黄素的浓度成正比。 利用硅镁吸附剂对核黄素的吸附作用除去样品中的干扰荧光测定的杂质，然后洗脱核黄素，测定其荧光强度。 试液再加入低亚硫