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* 基因工程复习 第一页，共二十三页。 一、获取目的基因 从基因文库中获取 反转录法 方法 人工合成 化学合成法 PCR技术扩增目的基因 问题1：人工合成的目的基因和从基因文库中获取的基因有 何区别？ 问题2：在获取目的基因过程中，使用到哪个工具酶？ 人工合成的目的基因没有非编码区和内含子 限制性内切酶 第二页，共二十三页。 几种限制性内切酶 第三页，共二十三页。 作用部位： 黏性末端 特点： 作用部位： 平末端 特点： 磷酸二酯键 旋转对称、碱基互补配对 磷酸二酯键 旋转对称 第四页，共二十三页。 二、构建基因表达载体（核心） 1、基因表达载体（重组DNA分子）组成： 启动子、目的基因、终止子、标记基因。 2、如何构建基因表达载体: 酶切——同一种限制酶 连接——DNA连接酶 3、运载体种类：质粒、动植物病毒、λ噬菌体衍生物。 4、运载体具备的条件： ①在宿主细胞保留并大量复制 ②有多个限制酶切点 ③有标记基因，便于筛选。 5、一般质粒都是被人工改造。 第五页，共二十三页。 三、导入受体细胞 生物 种类 方法 受体 细胞 简单过程 植物 细胞 动物 细胞 微生物 细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注射法 Ca 2+处理法 体细胞 体细胞 体细胞 受精卵 感受态 细胞 目的基因插入Ti质粒的T-DNA 转入农杆菌 导入植物细胞 稳定和表达 目的基因表达载体提纯 取卵 显微注射 受精卵 新性状动物 Ca 2+处理受体细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 吸收DNA 第六页，共二十三页。 四、目的基因的检测和鉴定 转录 翻译 复制 复制 逆转录 DNA RNA 蛋白质 中心法则 第七页，共二十三页。 思考一：受体细胞的DNA中是否已结合目的基因？ 1、目的基因的检测——分子水平 目的 方法 结果 受体细胞的DNA中是否已结合目的基因？ DNA分子杂交技术 出现杂交带 第八页，共二十三页。 思考二：目的基因是否转录出mRNA? 目的 方法 结果 分子杂交技术 出现杂交带 目的基因是否转录出mRNA？ 第九页，共二十三页。 思考三：目的基因是否翻译成蛋白质？ 目的 方法 结果 目的基因是否翻译成蛋白质？ 抗原—抗体杂交 出现杂交带 2、鉴定——个体水平 第十页，共二十三页。 基因工程概念 基因工程：在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出所需要的基因产物。 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基 因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 获取→连接→导入→检测鉴定 结果 人类需要的基因产物 第十一页，共二十三页。 （11天津理综卷）39、某致病基因h位于X染色体上，该基因和正常基因H中的某一特定序列BclI酶切后，可产生大小不同的片段（如图1，bp表示碱基对），据此可进行基因诊断。图2为某家庭病的遗传系谱。 下列叙述错误的是 A h基因特定序列中Bcl 1酶切位点的消失是碱基序列改变的结果 B II-1的基因诊断中只出现142bp片段，其致病基因来自母亲 C II-2的基因诊断中出现142bp，99bp和43bp三个片段，其基因型为XHXh D II-3的丈夫表现型正常，其儿子的基因诊断中出现142bp片段的概率为1/2 第十二页，共二十三页。 25、现有一长度为1000碱基对(by）的DNA分子，用限制性核酸内切酶Eco R1酶切后得到的DNA分子仍是1000 by，用Kpn1单独酶切得到400 by和600 by两种长度的DNA分子，用EcoRI、Kpnl同时酶切后得到200 by和600 by两种长度的DNA分子。该DNA分子的酶切图谱正确的是（） 第十三页，共二十三页。 26、（8分）聚合酶链式反应(PCR技术)是在实验室中以少