花药和花粉培养.pptVIP

关于花药和花粉培养;第一节 花粉和花药培养的概念和应用;花粉和花药的培养(pollen and anther culture) 是指在人工合成培养基上，改变花粉的发育途径, 使其不形成配子，而像体细胞一样进行分裂、分化，由单个花粉粒发育成完整单倍体植株的技术。;第4页，共58页，2022年，5月20日，3点29分，星期六;异同点：;二、植物花药/花粉培养历史;通过花药培养育成的甜椒新品种：海花三号 ;三、花药和花粉培养的应用;常规育种在杂交F5、F6代开始选择；花药培养在F1或F2代进行培养，再人工加倍处理．缩短育种周期3--5年 克服后代分离，大大缩短育种周期; 花粉单倍体是纯合配子体，从来源于配子体的植株中选择某一种基因型的概率是(1/2)n，而从常规杂交F2代群体中，选择某一基因型的概率为(1/2)2n，故单倍体育种的选择效率为常规育种的2n倍。 ;例子： 二倍体供体植株基因型为AaBb，若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株 常规方法： AAbb出现的概率为1/16，并且不能将AAbb与Aabb、aAbb区分开。 ;例子： 二倍体供体植株基因型为AaBb，若要从后代中选择基因为AAbb的纯合单株单倍体方法： AAbb出现的概率为1/4。; ; 可探索亲本染色体组的构成。分析单倍体植物减数分裂时，形成二价体的数目和形状，能确定染色体组内是否存在同源染色体。 ; 单倍体植株中基因不受显隐性的影响，每一个基因的作用均能表现出来。能用来研究基因的性质及其作用。还可用于基因的剂量效应分析。 ;4、构建连锁图谱 ;第二节 花粉孢子体发育途径;一、花粉发育的阶段;二、雄核发育途径;第20页，共58页，2022年，5月20日，3点29分，星期六;;胚状体发育途径;愈伤组织发育途径;愈伤组织转接种到再生培养基;第三节花药和花粉培养方法;一、花药培养;二、花粉培养;1）磁搅拌法 用磁力搅拌器搅拌培养液中的花药，使花粉游离出来； 2）超速旋切法 通过搅拌器中的高速旋转刀具破碎花蕾、穗子、花药，使小孢子游离出来（此法应用最广）。 4、小孢子纯化 对上述方法获得的小孢子混合物进行分级过筛、梯度离心处理纯化小孢子 ;梯度离心前 （小孢子形态、活力不一致）;(二)花粉培养方式;;;花粉培养过程;三、白化苗现象;（一）白化苗产生的影响因素及机理 1、内因 供体植株基因型（如籼稻比粳稻白苗率高）、花粉发育时期。 2、外因 预处理、培养基成分、激素水平与种类、培养条件和方法、愈伤组织转分化时间等。 3、机理 核基因起关键作用，导致质体DNA缺失，产生白苗。另外地、无性系变异也可能是原因之一。 ;四、影响雄核发育和花粉花药培养的因素;小孢子发育时期对诱导雄核发育非常重要。;芸苔属植物Brassica napus不同基因型的小孢子产胚率比较;1、植株生长条件 光温等因素均能影响花药培养力。一般 处于适宜生长条件（如温室中）较好。但物种间存在差异。 2、植株生长时期 一般是开花始期优于开花末期。 3、P花粉的频率 不同温度、日照时数、氮饥饿及生长物质处理提高P花粉的数量 ;;四分体: 醋酸洋红染色;单核晚期;一般而言，单核期（第一次有丝分裂前）对诱导反应最敏感，为最佳培养期。;不同物种诱导胚胎发生的最佳小孢子发育时期;对不同发育阶段的花药进行培养测试 确定最佳小孢子发育时期的形态特征 注意形态特征会因品种、发育状态、环境条件的变化而发生变化 ;单核期的确定：;A.通过显微镜下观察确定小孢子发育时期 ;B.通过花蕾外部特征确定小孢子发育时期 ;2、化学物质处理;（四）培养基 ;包括蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、葡萄糖、果糖、海藻糖等。 不同作物所需最适的碳源种类及浓度的所差异。 在辣椒花药培养中以6%的蔗糖浓度对胚状体的诱导率为最高。 在番茄花药培养中需要量高达14％。 其原因是花粉母细胞的渗透压比花丝等体细胞高的缘故，即高浓度的蔗糖不利于药壁、花丝等体细胞的生长，而利于花粉的生长。 一般认为单子叶植物比双子叶植物需糖的浓度要高。 玉米中蔗糖效果最好；而麦类作物中，麦芽糖似乎为最好的碳源。 较高浓度蔗糖可诱导花粉形成愈伤组织； 较低 浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗。;3、激素 细胞分裂素可促进胚状体形成； 生长素可诱导愈伤组织形成。 细胞分裂素与生长素比值高时可诱导愈伤组织分化苗 4、氨基酸 5、活性碳 6、pH ;（五）培养条件 ;花药组织的存在对小孢子的胚性分裂具有明显的促进作用。但花药壁损伤会释放有毒物质影响小雄核的发