分子生物学检验：单基因遗传病的分子诊断.pptVIP

全国高等学校医学规划教材－分子诊断学 * 轻型：轻度贫血或无症状，一般在调查家族史时发现。 中间型：轻度至中度贫血，患者大多可存活至成年。 重型：出生数日即出现贫血、肝脾肿大进行性加重，黄疸，并有发育不良。 其特殊表现有：头大、眼距增宽、马鞍鼻、前额突出、两颊突出。 其典型的表现是：臀状头，长骨可骨折。骨骼改变是骨髓造血功能亢进、骨髓胜变宽、皮质变薄所致。少数患者在肋骨及脊椎之间发生胸腔肿块，亦可见胆石症、下肢溃疡。 常见并发症有：急性心包炎、继发性脾功能亢进、继发性血色病。 若仅是一条染色体上的一个α基因缺失或缺陷，则α链的合成部分受抑制，称为α+地贫。 若每一条染色体上的2个α基因均缺失或缺陷，称为α0地贫。 纯合的α-地贫基因型突变，因此尽管只有2个基因功能性缺陷，但临床上也表现出重度HbH病（偶可致胎儿水肿或死亡）。 * 基因缺失和有些点突变可致β链的生成完全受抑制，称为β0地贫。 有些点突变使β链的生成部分受抑制，则称为β＋地贫。 β0包括Int，CD41-42，CD31，CD14-15，CD17，CD71-72，IVS-I-1，CD43，CD27/28。 β+包括IVS-II-654，-28，-29，-30，-32，CAP，IVS-I-5，βE。 * a-地贫的基因型与表现型 Normal (αα/αα) 正常 α+ thal trait (αα/-α3.7) (αα/-α4.2) 静止型－单一α基因缺失或丧失功能 临床无任何症状，一般血液学检查无异样，仅平均红细胞体积(MCV) 位于正常值下限。 a-地贫的基因型与表现型 Hb H disease (- α 3.7/--SEA) (- α 4.2/--SEA) αo Thal trait (αα /--SEA) ( - α/ - α) 血红蛋白H病－3个α基因缺失或丧失功能 肝脾肿大，中度贫血。小细胞，低色素，HbH含量较高，易发生溶血，有些病例需不定期输血，症重者甚至需切除脾脏。 标准型－2个α基因缺失或丧失功能 临床无症状，血液学检查出现轻微贫血，红细胞大小不均一，平均红细胞体积(MCV) 及平均红细胞血红蛋白量(MCH)明显偏低。 a -地贫的基因型与表现型 Hb Barts Hydrops (--SEA/--SEA) Hb Bart’s 水肿胎儿综合症 －4个?基因缺失或丧失功能 患胎于妊娠晚期或产后数小时内死亡，全身水肿，肝脾肿大。由于胎儿无法合成?亚基，脐血血红蛋白（ Hb Bart’s ，?4）含量高。 a-地贫疾病严重程度的单倍型顺序 a2a1T a2- - a1a2Ta1 -a1T - - 纯合的α-地贫基因型突变，为严重的HbH，偶可致胎儿水肿或者死亡 ?-地中海贫血 ?-地中海贫血是一种由于?-珠蛋白基因突变导致肽链合成减少或缺乏而产生的单基因遗传血液病，多由?-珠蛋白基因点突变所致。 在中国人群中常见的突变位点有CD41-42M， -28M， IVS-II-654M，CD71-72M等。 11ｐ15.5 EXON 1 IVS 1 EXON 2 EXON 3 IVS 2 Promoter mutation RNA splicing Initiation mutation Frameshift Nonsense Poly(A) signal β地中海贫血的点突变 b-地贫的基因型与表现型 重型?-地中海贫血 所有患者有组织缺氧症状，可出现“地中海贫血面容”，生长发育迟缓。红细胞体积小且低色素。过剩的游离α链形成α链包涵体，引起溶血性贫血，靠输血维持生命。 ?＋/ ?＋、?0/ ?0 、?0/ ?＋ （纯合子或双重杂合子） 轻型?-地中海贫血 患者症状较轻，轻度贫血，轻度肝脾肿大。红细胞脆性降低，小细胞，低色素，MCV、MCH较低。 ?/ ?＋、?/ ?0 （杂合子） b-地贫的基因型与表现型 中间型?-地中海贫血 患者临床症状介于重型和轻型之间，如中度偏重贫血，生长发育迟缓，黄疸等。血液检查呈小细胞低色素贫血症。 ?＋/ ?＋、?＋/ ?0 （纯合子或双重杂合子） 筛查的方法 血常规 MCV，MCH，RDW Hb typing HbA2（血红蛋白电泳，HPLC） 基因诊断 Gap-PCR 反向斑点杂交 Gap-PCR原理 Location of primers and detection of --SEA deletion by gap-PCR ?-地中海贫血基因诊断结果判读 M. DNA Marker 1. 未发生-? 3.7、-? 4