分子生物学检验：第四节 核酸分子标志物.pptVIP

第四节 核酸分子标志物 核酸分子标志物的分类 随着分子生物技术的发展以及对基因组学、转录组学和代谢组学的研究，引入了核酸分子标志物（nucleic molecular biomarker）的概念。 某些分子标志物可反映患者基因功能、蛋白质功能及代谢功能，对疾病的早期诊断、指导临床治疗、提高疗效、减轻患者负担以及节省医疗资源，实现个体化治疗有重要意义。 根据检测的特点将核酸分子标志物分为：基因突变位点、基因多态性位点、等位基因等。 （一）基因突变 基因突变的发生与DNA的复制和损伤修复、单基因遗传病、癌变及衰老有关。基因突变位点是常用的分子标志物。 致病基因突变中，70%是点突变（49%为错义突变），23%为小片段插入/缺失，7%为大片段插入/缺失。 HBB基因突变 正常成人的血红素是由两条α-肽链和两条β-肽链所构成。 镰形细胞贫血症患者的α-链完全正常，但β-链的DNA序列在起始端的第20位核苷酸发生点突变，由原來的GAG-变为-GTG-（A-T），则在翻译时，β-链近N 端的第6位氨基酸由谷氨酸-缬氨酸。 BRCA1基因突变 BRCA1基因定位于17q21，约100个kb，BRCA1编码蛋白的N末端序列含有一环状结构域，能够与BRCA1相关蛋白结合。 野生型BRCA1基因属于抑癌基因， BRCA1基因突变使其具有的抑癌功能受影响，已发现的BRCA1/2的突变有数百种之多，其中有BRCA1基因突变者，患乳腺癌和卵巢癌的风险分别是50%～85%和15%～45% 。 FⅧ基因突变 在FⅧ基因的2535位核苷酸发生了C→A碱基置换，导致826Asp(GAC)→Glu(GAA)错义突变。 A 正常对照 B 血友病A患者 （二）基因多态性位点 人类基因多态性来源于基因组中重复序列拷贝数的不同、单拷贝序列的变异以及双等位基因的转换或替换。 分为：DNA片段长度多态性（RFLP）、微卫星多态性（STR）、单核苷酸多态性（SNPs）及拷贝数多态性（CNVs）。 基因多态性位点与疾病的易感性有关。 FⅧ基因多态性位点 利用致病基因内外的RFLP作为特异分子遗传标志物，通过家系成员间的连锁分析确定血友病基因A的遗传情况。 鼻咽癌基因多态性位点 鼻咽癌是一种常见于中国南方的上皮性恶性肿瘤，常见为3号染色体结构异常。 用STR分析方法发现低分化鼻咽癌患者在染色体3p21-26区域的的等位基因杂合性丢失频率为66.7%，提示该区域内存在一个或多个与肿瘤发生密切相关的抑瘤基因。 鼻咽癌患者染色体3p21-26的16个微卫星多态性位点等位基因杂合性丢失检测结果 （三）等位基因 基因的多态性导致相关的基因座位形成多个等位基因（复等位基因），这些等位基因成为了分子标志物的一种。 等位基因的检测是针对多态位点进行。临床上常用于基因分型和肿瘤靶向药物的“靶标”检测 。 等位基因与疾病的易感性有关。 CYP2D6基因及等位基因 CYP2D6是乳腺癌化疗药物他莫昔芬（TAM）的代谢关键酶。目前已发现超过100种CYP2D6等位基因的变异，主要为SNPs。 CYP2D6基因的多态性决定了代谢表型的多态性。使酶的活性表现为缺失、降低、正常或增强等类型。分为：强代谢者（含2以上个正常功能等位基因）、正常代谢者（ 2个正常功能等位基因）、中等代谢者（含1个正常功能1个无效等位基因/ 2个功能降低等位基因/1个功能降低1个无效等位基因）和弱代谢者（2个无效等位基因）。 TAM疗效依次降低。 因此CYP2D6基因多态性成为评价乳腺癌患者接受TAM治疗疗效的独立预测因素。有助于早期确定那些无功能的或存在严重功能损害的CYP2D6变异体,避免无效用药。 CYP2D6基因突变型 UGT1A1基因及其等位基因 在结直肠癌治疗中，UGT1A1基因的多态性与药物伊立替康 (CPT-11)表达活性相关，可用于临床预测CPT-11严重不良反应的发生率。 患者在伊立替康治疗前检测UGT1A1*28，可预测伊立替康药物的毒性，从而选择用药剂量： UGT1A1*28为纯合子，使用伊立替康药物毒性较大，应减少剂量； UGT1A1*28为杂合子，使用伊立替康药物毒性一般，须临床观察用药； 没有检测到UGT1A1*28，使用伊立替康标准剂量。 （四）RNA 有些基因的一个mRNA前体通过不同的剪接位点产生不同的mRNA剪接异构体（可变剪接 ），可变剪接是导致人类基因和蛋白质数量较大差异的重要原因 。 实验研究表明，可变剪接与许多遗传疾病相关。其中约15%的变异影响pre-mRNA的剪接。 β 地中海贫血 由于非编码区