鬼针草茎叶微生物发酵前后总黄酮HPLC色谱图的比较研究.docxVIP

鬼针草茎叶微生物发酵前后总黄酮HPLC色谱图的比较研究 鬼针草茎、叶微生物发酵前后总黄酮hplc色谱图的比较研究 　　摘要：对鬼针草茎、叶经微生物发酵前后总黄酮hplc色谱图进行了分析比较。采用welchmaterials-c18柱（4.6mm×250mm，5μm），以乙腈-0.2%甲酸水溶液进行梯度洗脱，检测波长360nm，得hplc色谱图，再对各色谱图的各色谱峰的相对率进行分析比较。结果鬼针草茎、叶发酵前后hplc指纹图谱有较明显的改变，各吸收峰相对率也有较显著的改变。微生物发酵使鬼针草总黄酮中某些化学成分发生了生物转化，其化学成分的组成有较显著的变化。 　　关键词：鬼针草;总黄酮;微生物发酵;hplc 　　中图分类号：tq041文献标识码：a文章编号：1671-0460（2020）02-0317-04 　　abstract：tocarryoutthecomparativestudyonhplcchromatogramoftotalflavonoidsinthestemsandleavesofbidensbipinnatal.beforeandafterthemicrobialfermentation，welchmaterials-c18columnwasusedforgradientelutionofacetonitrile-0.2%formicacidinaqueoussolution，thedetectionwavelengthwas360nmandthehplcchromatogramwasobtained.then，therelativerateofeachpeakofchromatogramwasanalyzedandcompared.thehplcfingerprintsofstemsandleavesofbidensbipinnatal.hadobviouschangesbeforeandafterfermentation，andtherelativeratesofabsorptionpeaksalsohadsignificantchanges.microbialfermentationresultedinthebiotransformationofsomechemicalconstituentsinthetotalflavonoidsofbidensbipinnatal.，andthecompositionofthechemicalconstituentshadsignificantchange. 　　keywords：bidensbipinnatal.;totalflavonoids;microbialfermentation;hplc 　　發酵中药为我国传统中药加工炮制的重要方法之一，具有悠久的历史，目前临床应用的发酵中药品种主要有神曲、半夏曲、红曲、淡豆豉等。利用微生物来发酵中药本质上为利用微生物代谢过程中产生的各种酶类来催化中药中的有效成分的一种生物转化反应。利用微生物强大的生物转化能力可以大幅度提高中药活性成分的含量，或者可以生成新的活性成分，提高中药的药效，降低毒副作用，扩大药用资源等[1-9]。但是传统的中药发酵是一种粗放式的自然发酵，发酵过程不易控制，仅仅利用的是自然界的菌种，且菌种通常不纯，为几种甚至几十种，并且在发酵的过程中极有可能混入有害菌种，这些因素都极大地限制了微生物的作用，使微生物在中药中的应用前景没有最大限度地发挥出来。现代中药发酵技术，又称为中药微生物转化技术，融入了现代生物技术和手段设备的方法，能够准确控制发酵的菌种种类与数量，同时对发酵过程中涉及到的影响发酵的温度、湿度、ph值、时间等因素都可以实现有效准确的动态控制，所得发酵品的质量可控水平大幅度提升。因此利用微生物发酵中药来研究开发特色新药具有广阔的应用前景和挑战。中药鬼针草为鬼针草属植物（bidens）的干燥全草，目前，国内外对鬼针草的研究主要体现在鬼针草的资源考证及分布、鬼针草中主要化学成分的分离制备、质量标准的建立和鬼针草的药理作用等方面[10-13]，目前对其微生物发酵的报道较少。本课题组前期的研究结果表明发酵鬼针草中的部分成分的含量发生了变化[14，15]，推测其成分组成也有可能不同。本文主要对发酵前后茎、叶纯化后的总黄酮，采用hplc法研究其总黄酮色谱图的区别，为微生物发酵鬼针草的药效学研究提供依据。 　　1仪器、材料 　　dt-100型分析天平（北京医用仪器厂），agilent1100型高效液相色谱仪配有dad检测器（美国安捷伦公司）;石油醚、甲醇均为分析纯，购于天津市富宇精细化工有限公司;乙腈（色谱纯）、甲酸（分析纯）购于国药集团