代谢控制发酵.pptVIP

第一页，共二十一页，2022年，8月28日 代谢控制发酵的定义 它是利用遗传学或其它生物、物理、化学 方法，人为地在脱氧核糖核酸（DNA）的分 子水平上，改变和控制微生物的生长代谢途 径，使有用的代谢产物大量生成、积累的发 酵技术。最早在氨基酸发酵中得到成功应用。 第二页，共二十一页，2022年，8月28日 代谢调节机制 微生物细胞的调节机制 酶合成的调控（转录水平上的调节） 诱导——促进酶的合成 阻遏——抑制酶的合成（包括终产物阻遏和分解代谢物阻遏） 第三页，共二十一页，2022年，8月28日 代谢调节机制 酶活性的调控 一定数量的酶通过其分子结构的改变来调节催化反应的速率。 控制机制：终产物抑制或激活；通过辅酶水平的活性调节；酶原的活化；潜在酶的活化 细胞膜渗透性的控制 根据酶在代谢调节中作用不同分为：调节酶（变构酶、同功酶、多功能酶）、静态酶和潜在酶。 第四页，共二十一页，2022年，8月28日 代谢控制发酵的基本思想 切断支路代谢 选育营养缺陷型突变株 原菌株由于发生基因突变，致使合成途径中某一步骤发生缺陷，从而丧失了合成某些物质的能力，必须在培养中外源补加该营养物质才能生长的突变型菌株。 最典型例子：高丝氨酸营养缺陷型或苏氨酸营养缺陷型菌株达到赖氨酸的积累。 第五页，共二十一页，2022年，8月28日 代谢控制发酵的基本思想 选育渗漏缺陷突变株 遗传性障碍不完全的缺陷型。 （注：这种突变只是其中某一种酶的活性降低，而不是完全丧失。不能合成过量的最终产物，故不会造成反馈抑制而影响中间代谢产物的积累。） 第六页，共二十一页，2022年，8月28日 代谢控制发酵的基本思想 解除菌体自身的反馈调节 选育抗类似物突变株（代谢拮抗物抗性突变株）形成途径：变构酶结构基因突变；调节基因突变。 酶活性的利用 营养缺陷型回复突变株的应用 调节酶的失活与否，可能直接表现为某种营养缺陷型。可以采用回复突变的方法，从回复突变株中获得多途径中的调节酶接触反馈调节的调节突变株。 第七页，共二十一页，2022年，8月28日 代谢控制发酵的基本思想 增加前体物的合成 通过选育某些营养缺陷型或结构类似物抗性突变株以及克隆某些关键酶的方法，增加目的产物的前体合成，有利于目的产物的大量积累。 去除终产物 特殊调节机制的利用：①多种产物控制机制的利用②平衡合成的利用③代谢互锁的利用④优先合成的变换。 条件突变株的应用 选育不生成副产物的菌株 选育生产代谢拮抗物质的菌株 第八页，共二十一页，2022年，8月28日 微生物代谢控制发酵的措施 应用营养缺陷型菌株。 选育抗反馈调节的突变株。 即已解除了反馈调节作用的突变株。因为反馈抑制和阻遏，或两者引起的自动调节作用已被削弱或解除，所以能合成较多的最终产物。 选育细胞膜通透性突变株：使终产物在细胞内不能大量积累而引起反馈调节。 利用营养缺陷型回复突变株或条件突变株的方法，解除终产物对关键酶的调节。 应用遗传工程技术，创造理想的超微生物（构建目的工程菌株）。 发酵的环境条件的优化。 第九页，共二十一页，2022年，8月28日 发酵条件控制? 当菌株选育确定后，环境条件的合适与否是发酵成败的重要因素。环境条件既影响微生物生长，又影响代谢速度和方向及产物的形成和积累。 影响发酵过程的因素很多，如温度、pH、通风、搅拌、罐压力、溶氧量等，必须适当控制各种条件，掌握发酵动态，是整个发酵过程顺利进行。 例如谷氨酸棒杆菌发酵，可以通过控制发酵条件包括O2浓度、NH4浓度、pH、磷酸盐浓度、生物素浓度等，转换代谢方向，使其不生成Glu，而生成乳酸、a-KGA、琥珀酸、谷酰胺等产物。 第十页，共二十一页，2022年，8月28日 氨基酸的代谢控制与发酵（以Lys生产为例） 赖氨酸 第十一页，共二十一页，2022年，8月28日 氨基酸的代谢控制与发酵（以Lys生产为例） 切断或减弱支路代谢 切断支路代谢：选育和应用营养缺陷型菌株，切断丙氨酸、苏氨酸和蛋氨酸的分支途径以积累Lys。 变换优先合成： 渗漏缺陷型的选育（高丝氨酸渗漏突变株） 降低HD酶（高丝氨酸脱氢酶）活性：增强代谢流 从优先合成Met和Thr转向合成Lys，Met和Thr 、Thr合成减少，解除了Thr+Lys的协同反馈抑制。 第十二页，共二十一页，2022年，8月28日 氨基酸的代谢控制与发酵（以Lys生产为例） 解除反馈抑制 选育抗结构类似物突变株 解除AK酶的反馈调节 通过诱变，使编码AK酶（天冬氨酸激酶）的结构基因发生突变，使AK酶对Lys及结构类似物不敏感，即使苏氨酸过量，该激酶也不与Lys或类似物结合。 解除PS酶的代谢调节 解除代谢互锁：赖氨酸与亮氨酸的生