试验十一抗心肌缺血药物作用研究.pptVIP

试验十一、抗心肌缺血药物作用研究 第一页，共二十八页。 一、目的 了解抗心肌缺血新药的评价原则。 学习心肌缺血动物模型建立方法及评价指标。 观察受试化合物对心肌缺血大鼠的影响，判断其是否具有抗大鼠心肌失常的作用。 第二页，共二十八页。 二、与试验相关的理论知识要点  心肌缺血观察指标与方法 心肌缺血，是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。 （1）心电图指标观察： 皮下放置心电图肢体导联电极，测标准Ⅱ导心电图观察药物对S-T段、T波幅度的影响。 第三页，共二十八页。 （2）形态学观察： 1.摘取心脏，用生理盐水冲洗，除去血污，剔除血管脂肪等非心肌组织，用吸水纸吸去水分，称全心湿重。 2.沿冠状沟切除右心房和右心室，留下室间隔和左心室，称重。顺房室沟从心尖到心基部平行将狗心室切成1cm厚的心肌片，用生理盐水冲洗干净。 第四页，共二十八页。 3.将心肌片放在1%的氯化三苯基四氮唑（TTC,用pH7.4～7.8的0.2mol/L PBS配制）溶液中，在37℃温孵7min染色,染色过程中不时搅拌染色液使之与心肌有充分接触。 4.染色后立即用生理盐水冲洗多余的染料。 梗死区不着色，非梗死区被TTC染为红色。 5.剪去各心肌片被染色的非梗死区心肌，把未染色的梗死心肌称重，除以左心室重即得梗死范围占左心室重的%。 第五页，共二十八页。 （3）酶学测定： 测定血液、心肌组织中的肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、脂质过氧化产物丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）等指标反应心肌缺血情况。 第六页，共二十八页。 （4）心脏功能及血流动力学试验 观测指标应包括冠脉流量，心输出量、左室作功左室内压、左室舒张末期压、左室内压最大变化速率、动脉血压、外周阻力等，进行连续动态观测。 第七页，共二十八页。 （5）心肌耗氧量试验  心肌代谢、特别是氧的供需矛盾，是冠心病的重要病理生理变化，而多数中药常通过降低心肌耗氧量、改善心肌代谢而达到治疗目的。因此，新药对心肌耗氧量的影响，应列为必做项目。 可供选择的试验方法如下 1.直接测定：心肌耗氧量测定，心肌组织氧分压 测定（可多部位、多层次测定），离体心脏、心肌片或心肌细胞耗氧量测定。 2.间接测定：张力时间指数，心肌耗氧指数，正性肌力作用。 3.耐缺氧试验：离体心脏或心肺灌流耐缺氧试验，心肌细胞培养耐缺氧试验及其他。 第八页，共二十八页。 三、教学试验安排及内容 （一）教学分组 在一个教学单元内，根据学生人数，将学生分为8组，每组2～5人，并分成上下两班，4组/班。 （二）试验方案 全班均采用异丙肾上腺素造模； 上半班采用A受试物，建议受试物为丹参酮ⅡA磺酸钠； 下半班采用B受试物，建议受试物为丹参注射液。 第九页，共二十八页。 四、试验方法及步骤 （一）试验材料 试验药品： 乌拉坦（Urethane），生理盐水配制成20%溶液； 0.5%异丙肾上腺素（Isoprenaline）；生理盐水，5%葡萄糖注射液。 阳性药：0.2%维拉帕米。 受试物：丹参酮ⅡA磺酸钠，配制成1%、0.2%溶液； 丹参注射液，50%葡萄糖配制成含生药 1.5g/ml、0.3g%溶液。 试验仪器： 生物机能试验系统、紫外、动物秤、大鼠手术台、眼科镊、1ml、5ml注射器、4#、6#针头。 第十页，共二十八页。 （二）试验方法 取大鼠，称体重； 腹腔注射乌拉坦1～2g/kg（20%乌拉坦，5～6ml/kg）麻醉； 仰卧位固定于手术台上,针型电极插入大鼠皮下，打开生物机能试验系统，待心电图稳定后开始试验，先记录一段正常的大鼠心电图； 分组及给药方案如下： 第十一页，共二十八页。 上、下半班： 第1组、第5组：静脉注射生理盐水1ml/kg； 第2组、第6组：静脉注射0.2%维拉帕米1ml/kg； 第3组：静脉注射0.2%丹参酮ⅡA磺酸钠； 第7组：静脉注射0.3g/ml丹参注射液1ml/kg， 第4组：静脉注射1%丹参酮ⅡA磺酸钠； 第8组：静脉注射1.5g/ml丹参注射液1ml/kg， 5min后，静脉快速注射0.5%异丙肾上腺素溶液1ml/kg， 记录大鼠心电图。 第十二页，共二十八页。 注射异丙肾上腺素后，以心电图出现S-T段改变或T波变化为缺血标志。 每次给完一种药后，观察并记录正常、给Iso前和给Iso后1min、3min、5min、10min、15min、20min、30min和60min的T波和S-T段偏移。 将试验结果记录与表格中。 第十