酵母细胞的固定化.pptxVIP

酵母细胞的固定化会计学第1页/共25页课题目标:1、说出固定化酶和固定化细胞的原理；2、尝试制备固定化酵母细胞，并利用固定化酵母细胞进行酒精发酵。课题重难点：制备固定化酵母细胞。第2页/共25页温故知新：酶制剂1、洗衣粉中添加________可以更有效地清除顽渍。常用的酶制剂有_________________四类。蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶温度2、影响酶活性的因素有_______、________和_________。酸碱度表面活性剂第3页/共25页酶制剂的优点： 催化效率高、低耗能、低污染，大规模地应用于食品、化工等各个领域。第4页/共25页酶制剂存在的缺陷： 1、通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活 2、溶液中的酶很难回收，不能被再次利用，提高了生产成本； 3、反应后会混在产物中，可能影响产品质量。第5页/共25页想一想 如果你是工程技术人员，你如何解决这个问题？固定化酶技术和固定化细胞技术第6页/共25页一、基础知识：固定化酶的应用实例 1、生产高果糖浆的方法是什么？2、生产高果糖浆需要什么酶？其作用是什么？这种酶有何特点？3、了解高果糖浆生产过程。4、这种方法的优点是什么？第7页/共25页1、生产高果糖浆的方法是？ 固定化酶技术。即将酶固定在一定空间内的技术（如固定在不溶于水的载体上）。第8页/共25页2、生产高果糖浆需要什么酶？其作用是什么？这种酶有何特点？ 生产高果糖浆需要葡萄糖异构酶；其作用是将葡萄糖转化为果糖；这种酶稳定性好，可持续发挥作用。第9页/共25页3、固定化酶技术生产高果糖浆的过程：第10页/共25页4、这种方法的优点是什么？固定化酶技术的优点：（1）使酶既能与反应物接触，又能与产物分离；（2）固定在载体上的酶可以被反复利用。第11页/共25页 在生产实际中使用固定化酶技术的不足：一种酶只能催化某一种或某一类的化学反应，而在生产实际中很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能进行，所以操作比较麻烦。怎么办?可采用固定化细胞技术。第12页/共25页（二）、固定化细胞技术1、概念：利用物理或化学方法将细胞固定在一定空间内的技术。细胞中含有一系列酶，在细胞正常生命活动的过程中，通过代谢产生所需要的代谢产物。第13页/共25页2.将酶或细胞固定化的方法将酶（或细胞）包埋在细微网格里包埋法将酶（或细胞）相互连接起来化学结合法将酶（或细胞）吸附在载体表面上物理吸附法第14页/共25页酶和细胞固定方法的选择（1）、方法①酶适合采用化学结合和物理吸附法固定②细胞适合采用包埋法固定（2）、原因①细胞个大，酶分子很小②个体大的细胞难以被吸附或结合而个小的酶容易从包埋的材料中漏出第15页/共25页3、固定化细胞常用的载体常用的不溶于水的多孔性载体有哪些？明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素、聚丙烯酰胺等 海藻酸钠聚丙烯酰胺第16页/共25页想一想固定化酶技术和固定化细胞技术这两种方法 从操作角度来考虑，你认为哪种方法更容易？固定化细胞技术哪一种方法对酶活性的影响更小？固定化细胞技术第17页/共25页2. 实验设计1. 制备固定化酵母细胞（1）酵母细胞的活化：1g干酵母＋10mL蒸馏水→50mL烧杯→搅拌均匀→放置1h，使之活化。活化是指什么？　活化是指让处于休眠状态的微生物重新恢复正常生活状态的过程。第18页/共25页（2）配制CaCl2溶液： 0.83gCaCl2＋150mL蒸馏水→200mL烧杯→溶解备用。第19页/共25页（3）配制海藻酸钠溶液：0.7g海藻酸＋10mL水→50mL烧杯→酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化→蒸馏水定容到10mL。微火加热并不断搅拌的目的是什么？防止海藻酸钠焦糊。第20页/共25页(4)海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合：　将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。为什么要海藻酸钠溶液冷却后才能加入酵母细胞？防止高温杀死酵母细胞。第21页/共25页（5）固定化酵母细胞：　以恒定速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到CaCl2溶液中，形成凝胶珠状颗粒。第22页/共25页 刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构。 检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法： 一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。 二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也能表明制备的凝胶珠是成功的。第23页/共25页这一阶段成功与否呢？怎样评价？观察凝胶珠的颜色和形状:如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色，说明海藻酸钠的浓度偏低，固定的酵母细胞数目较少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠的浓度偏高，制作失败，需要再作尝试。第24页/共25页（二）．