动物细胞融合完整版课件.pptx

与植物体细胞杂交技术中的原生质体融合类似，动物细胞工程中也包括细胞融合技术。 细胞融合就是在一些融合因子的作用下，将两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的技术。细胞融合可以在基因型相同的细胞间进行，也可以在基因型不同的同种生物细胞间以及亲缘关系非常远的不同种生物细胞间进行。p77 通过细胞融合可以产生具有新特性的细胞，因此，这一技术已经成为研究细传、细胞免疫、肿瘤等的重要手段。 那么，两个动物细胞是如何融合成一个细细胞融合技术有什么应用？动物细胞融合技术实例1：自然条件实例2：人工诱导电流刺激（电脉冲）、激光融合物理法：诱导方法化学法：聚乙二醇（PEG)灭活的仙台病毒生物法：受精作用1970年人工条件下的人-鼠细胞融合实验什么是病毒的灭活？ 灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程：灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面↓细胞膜被病毒颗粒穿通↓细胞膜连接↓细胞核融合，形成杂交细胞一、两个或多个动物细胞经诱导可融合形成一个细胞原理：细胞膜出现一定程度损伤，细胞相互粘连而融合。细胞膜的流动性应用：①通过人-鼠杂交细胞丢失人的染色体可进行____p78；②利用淋巴细胞和癌细胞的融合，培育__________。p79 抗体 抗原 动物体内 多种B细胞不能无限增殖产生大量抗体二、细胞融合技术是制备单克隆抗体的基础传统抗体制备方法及缺陷p79抗原不纯抗体不纯缺陷： 产量低、纯度低， 且抗体的特异性差、灵敏度低。如何解决这个问题呢？刺激浆细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验一个大胆的猜想动物细胞融合B淋巴细胞杂交瘤细胞单克隆抗体动物细胞培养骨髓瘤细胞1975年，米尔斯坦和柯勒1984年，诺贝尔生理学或医学奖阅读课本P80-81,了解单克隆抗体的制备过程动物细胞培养技术获得产生相应抗体的B淋巴细胞（使淋巴细胞产生抗体）B 、BB 、B瘤 、瘤瘤 、瘤经免疫的动物的脾细胞第一次筛选：利用选择培养基（HAT培养基）获得杂交瘤细胞动物细胞融合技术第二次筛选：细胞克隆、 抗体阳性检测获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞（克隆培养）杂交瘤细胞的特点：既能无限增殖，又能产生特异性抗体多孔细胞培养板抗体检测板怎样二次筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞？将杂交瘤细胞群稀释，约每孔1个细胞进行培养（克隆培养/细胞克隆）？一段时间后，检测各孔上清液中细胞分泌的抗体抗原抗体杂交技术上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔专一抗体检测呈阳性多孔细胞培养板单克隆抗体的最大优点：纯度高，可大量制备，在应用时具有特异性强（只能识别特异抗原分子的特殊部位）、灵敏度高的特点p81单克隆抗体的应用：（1）作为诊断试剂——最广泛应用同位素标记的单克隆抗体，在特定组织中成像，定位诊断相关疾病。抗原-抗体杂交技术准确、高效、简易、快速结合同位素的单抗-----生物导弹单抗放射性同位素⑵用于治疗疾病和运载药物 ①特异性强、灵敏度高 生物导弹——单克隆抗体＋抗癌药物 ②疗效高、毒副作用小C1、下列有关制备单克隆抗体的叙述,错误的是(　)A.采用的动物细胞工程技术包括动物细胞培养和动物细胞融合B.两次筛选的目的分别是筛选出杂交瘤细胞和筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞C.要先用胃蛋白酶处理得到单个细胞,然后用诱导剂处理得到杂交瘤细胞D.运用的生物学原理包括细胞分裂和细胞膜具有流动性2.下图为科研工作者利用小鼠制备H7N9禽流感病毒单克隆抗体的过程,请据图回答有关问题。显微注射技术 (1)图中将H7N9病毒抗原基因导入受体细胞常用的方法是 。?(2)在受体细胞的培养过程中,为了防止污染,通常还要在细胞培养液中添加一定量的　,其培养液与植物组织培养的培养基相比,特有的天然成分是　。抗生素 动物血清 ?(3)图中X细胞一般选用　,与植物体细胞杂交相比,诱导X细胞和Y细胞融合还可采用　。?骨髓瘤细胞 灭活的病毒 ?(4)单克隆抗体的制备过程需要经过多次筛选,首先用特定的选择性培养基筛选出　,最终获得足够数量的　的细胞，选出符合要求的细胞后,可在体外条件下或注射到　进行增殖培养。杂交瘤细胞 能产生所需抗体小鼠腹腔 ?(5)利用上述技术生产的单克隆抗体可制作成诊断盒,用于准确、快速诊断H7N9禽流感病毒的感染者,这种诊断运用了 杂交技术,这体现了单克隆抗体 　的特性。?抗原—抗体 特异性强、灵敏度高 问题：我们所学的哪种细胞能够无限增殖？/有什么方法能使B淋巴细胞也具有这样的能力？（诺贝尔生理学奖或医学奖）单克隆抗体是生物制药产业增长最快的领域之一约占到全球生物制药市场的35％左右。 2010年全球抗体药物市场将达到300多亿美元的规模我国也将达到50亿元人币的销售额