人体免疫学课件-免疫学诊断.pptVIP

正向间接血凝 反向间接血凝 4. 间接凝集抑制反应（检测标本中是否存在与致敏Ag相同的Ag） （三）中和试验（病毒、毒素中和试验） 原理：病毒与抗血清中抗体特异结合后失去感 染易感动物、鸡或鸭胚、细胞活性 例1 -NDV 9～11d鸡胚 24～48h鸡胚死亡 -NDV+抗血清 9～11d鸡胚 鸡胚不死亡 例2 口蹄疫病毒(FMDV) 4～7d乳鼠 乳鼠死亡 FMDV+抗血清 4～7d乳鼠 乳鼠不死亡 例3 FMDV 仔猪肾传代细胞(IB-RS-2)单层细胞 细胞病变(CPU)：变圆、成串、空泡、变形、脱落、裂解 FMDV+抗血清 IB-RS-2单层细胞 细胞无病变CPU 用途： 1.用已知血清鉴定病毒——诊断病毒病 2.用已知病毒检测血清抗体——诊断病毒感染，测定病毒免疫血清效价（中和价） ????免疫学诊断技术 包括 体液免疫检测技术——血清学技术 细胞免疫检测技术 第一节 体液免疫检测技术 ——血清学试验(抗原抗体试验) 种类：1．沉淀试验 2．凝集试验 3．补体参与的试验 传统试验 4．中和试验 5．标记抗体试验——新技术 一．体外抗原抗体反应的一般规律 1．高度特异性 异嗜性抗原与免疫血清之间 交叉性 肠道杆菌与免疫血清之间 解决办法： 将动物免疫血清中的多克隆抗体通过吸收试验，制成单因子血清 应用杂交瘤技术制备单克隆抗体 2．反应可逆性 PH 7.0 T 370C Ag+血清(Ab) Ag-Ab复合物 PH＜3 T＞600C 利用抗原抗体特异性结合反应的可逆性规律，建立亲和层析技术，纯化免疫纯的抗原或抗体 亲和层析技术提取免疫纯抗体示意图 3．反应二阶段性 第一阶段反应——形成Ag-Ab复合物 第二阶段反应——出现可观察的现象 4. 浓度和比例 一定浓度范围，一定电介质存在下，二者比例适当 二．抗原抗体反应结果受多因素影响 （1）免疫血清质量要好 注意： -空腹采血 -防止细菌污染——用具灭菌，无菌操作 -防止溶血——用具灭菌后干燥，防止酒精与血接触 -保存好血清——加适量防腐剂，2-80C保存 （2）电解质 稀释抗原、血清常用0.85%NaCl溶液（生理 盐水），但稀释禽类血清用6%～8%盐水更好。 作用：降低抗原抗体的电势，完成二步反应 （3）温度：40C～560C均可 温度低反应慢，温度高反应快。 最常用370C 30min （4）PH值 稀释抗原、血清的溶液PH6.0～8.0均可以，最常用PH7.0～7.2 通常抗原抗体蛋白的等电点都在PH6以下，若抗原或抗体溶液PH接近等电点，自身就会凝聚，出现非特异性的凝集或沉淀反应 为了稳定PH，故在抗原抗体反应中最好用PH7.0～7.2的磷酸缓冲液（PBS）作抗原抗体稀释液 ※因为抗原抗体反应结果受多因素影响，为了证实试验的准确性，故在试验中一定要设立阳性、阴性和空白对照 三．各类抗原抗体反应简介 （一）沉淀试验 0.85%NaCl 可溶性抗原 +免疫血清 出现沉淀现象 (血清蛋白、病毒) （抗体） 比例适合 沉淀原 沉淀素 比例不适合 不出现沉淀现象 容易过多 前带现象 （稀释） 比例不适合——不能完成第二步反应 ——带现象 1．环状沉淀试验 原理：小试管内，下层沉