人体免疫学课件-免疫诊断.pptVIP

免疫学检测技术的应用 1.疾病的诊断 感染性疾病、自身免疫病、肿瘤、免疫缺陷病、超敏反应性疾病等。 2.疾病治疗效果评价 疾病预后、转归等监测 3.免疫功能检测 细胞免疫功能，体液免疫功能，非特异性免疫功能测定等。 第一节 抗原或抗体的体外检测 根据抗原与抗体特异性结合反应的特性，用肉眼观察或借助仪器检测抗原抗体反应的结果，由此对样品中的抗原或抗体进行定性、定量或定位分析。 + ? 一、抗原抗体反应的特点 1.高度特异性 抗体可变区与相应抗原表位的空间构型互补，高度特异性地结合。 2.反应可逆性 抗原抗体以非共价键结合，易受温度、pH和离子强度的影响而解离。 抗原抗体反应的特点 3.抗原抗体的比例合适 抗原略多于抗体的比例，可形成肉眼可见的复合物。 4.反应分两个阶段 非共价结合阶段——反应迅速 IC形成大复合物——反应较慢 二、影响抗原抗体反应的因素 1.抗原抗体的浓度比例 比例适当才能形成可见的反应复合物 2.电解质 常用0.85% NaCL溶液 3.温度 最适温度37度 4.酸碱度 最适PH 6～8 三、抗原抗体反应类型 （一）凝集反应 概念：颗粒性抗原(细菌、红细胞等)与相应抗体结合，在一定条件下出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应。 1.直接凝集反应 抗原与抗体直接混合作用，出现凝集为阳性结果。 ①玻片直接凝集法：定性试验 ②试管直接凝集法：半定量试验 试管法半定量试验 + ? 玻片直接凝集试验 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 2.间接凝集法 先将可溶性抗原或抗体吸附在颗粒载体上(如RBC, 乳胶颗粒)，再与相应抗体或抗原反应，出现凝集为阳性结果。 临床常用的有间接血凝试验、乳胶凝集试验等。 + → 待检样品 抗原吸附血球或乳胶颗粒 反应凝集物 3.间接凝集抑制试验 先将待检抗原与已知的抗体反应，再加入用已知抗原吸附的载体颗粒，不出现凝集为阳性结果。 例：乳胶凝集抑制试验检测HCG (妊娠诊断) ? 步骤1：将已知抗HCG抗体与待检标本混匀 ＋ ? ＋ 步骤2：加入HCG吸附的乳胶颗粒混匀 ? HCG吸附乳胶颗粒 结果判断： 不凝集为阳性结果 已知抗体 待检标本 凝集反应 （二）沉淀反应 概念：可溶性抗原与相应抗体结合，在一定条件下形成免疫复合物沉淀，称为沉淀反应。 1.速率散射比浊法 根据溶液中颗粒性物质对可见光的吸收强弱(朗伯-比尔定律)来测定IC的浓度，可通过仪器进行自动化检测。 2.琼脂扩散法 在琼脂凝胶中进行的沉淀反应，称为琼脂扩散试验。 (1)单向琼脂扩散试验 方法：将一定量的已知抗体加入融化的琼脂中制成凝胶板，打孔，在孔内加抗原，放湿盒内于37℃扩散24h。 结果：孔周围出现沉淀环。定量检测，环直径与抗原含量呈正比。 常用于Ig、C等含量测定。 单向琼脂扩散试验 Ag Ag Ag Ag 含抗体凝胶 抗原浓度 沉淀环直径 沉淀环 (2)双向琼脂扩散试验 方法：琼脂板中打孔，抗原与抗体分别加入孔中，放湿盒内于37℃扩散24h。 结果：两孔间之间出现沉淀线为阳性 常用于定性检测抗原或抗体中的相关成分 双向琼脂扩散试验 (3)对流免疫电泳 方法：将双向琼脂扩散反应放在电场中进行，使抗原抗体在电场力的作用下相对泳动，使反应速度加快，检测时间缩短。 结果：同双向琼脂扩散 Ag Ab - + 对流免疫电泳 （三）免疫标记技术 免疫标记技术是利用荧光素、酶、放射性同位素等物质标记抗原或抗体，通过检测标记物质的发光、颜色反应或射线强度，间接测定待检标本中的抗体或抗原的免疫学方法。 免疫标记技术是目前应用最广泛的免疫学检测技术，常用的方法有： 免疫酶测定技术 免疫荧光技术 放射免疫测定技术 免疫胶体金技术 1、酶免疫测定技术 概念：用酶标记已知抗原或抗体，检测标本中的相应抗体或抗原，将抗原抗体反应的高度特异性与酶催化底物的显色反应相结合的免疫学检测技术。 常用的标记酶 辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶。 常用的方法 酶联免疫吸附试验(ELISA) 双抗体夹心法——测定抗原 间接法——测定抗体 酶联免疫吸附试验 (ELISA) 将已知抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯板)上进行酶免疫反应，检测相应的抗体或抗原。 (1)双抗体夹心法(测抗原) 先将已知抗体吸附在固相载体上，加入待检抗原，再加入酶标记的已知抗体，反应后形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物，最后加入酶的底物显色。 固相 载体 Ag 已知抗体 病人血清 酶标记 的抗体 酶联免疫吸附试验(ELISA) (2)间接法 (测抗体) 先将已知抗原吸附在固相载体上，加入待检血清，再加入酶标记的抗抗体，反应后形成“抗原-抗体-酶标抗抗体”复合物，最后加