医学细胞生物学教案-免疫学诊断.docVIP

PAGE PAGE 5 §24 免疫学诊断 免疫学检测已广泛应用于免疫相关疾病的诊断、发病机制的研究、病情监测和疗效评价等各个方面。本章主要介绍常用免疫学检测技术的基本原理、基本步骤、结果判断及其应用。 §24-1 抗原或抗体的检测 一、抗原抗体反应的原理及特点 （一）特异性 空间互补、通过非共价键结合（包括氢键、静电引力、范德华引力和疏水性作用力）。 亲和力（affinity）；亲合力(avidity)； （二）分阶段 特异性结合阶段：不依赖于电解质，亲水性降低，反应速度快，反应现象肉眼不可见；可用速率测定方法进行检测。 非特异性聚合阶段：依赖于电解质，反应速度慢，反应现象肉眼可见；可用终点检测方法检测。 （三）抗原抗体反应的浓度比例及其反应现象 是定量测定抗原或抗体的理论基础。 抗原抗体反应的最适比（optimal ratio）或等价点（equivalence point）；半定量测定：效价 定量测定：用参考物或标准物 （四）可逆性（reversibility） 是亲和层析的理论基础，解离后抗原或抗体的活性不变。 二、抗原抗体反应的影响因素 （一）抗原、抗体的自身因素 1．抗原 抗原的理化性状、表位数目和种类等均可影响血清学反应结果；例如： 可溶性抗原：沉淀反应； 颗粒性抗原：出现凝集； 单价抗原：不出现可见反应； 红细胞同IgG类不完全抗体结合不出现直接凝集； 粗糙型细菌在生理盐水中易发生自凝等。 2．抗体 （1）来源 来自不同动物的免疫血清，其免疫性有差异。 家兔等大多数动物的免疫血清（R型）具有较宽的等价带，通常在抗原过量时，才易出现可溶性免疫复合物。 马等许多大动物和人的免疫血清（H型）等价带较窄，抗原或抗体过剩，均可形成可溶性免疫复合物。 家禽免疫血清不能结合哺乳动物的补体，并且在高盐浓度（80g/L NaCl）溶液中沉淀反应现象明显。 单克隆抗体一般不适用于沉淀反应或凝集反应。 （2）浓度 （3）特异性与亲和力 （二）反应的环境因素 1．电解质 如无电解质存在，则不出现可见反应；电解质浓度过高，则会出现盐析现象；通常应用0.85%NaCl水溶液作为抗原和抗体的稀释液；如果补体参与的溶细胞反应，除需要等渗的NaCl溶液外，还需适量的Mg2+和Ca2+离子参与。 2．pH 抗原抗体反应一般以pH6~8为宜，当pH达到3左右时，细菌可出现酸凝集现象。 3．温度 一般在15~40?C范围内均可进行，但最适温度是37?C。在此范围内温度增高，反应速度加快，但也容易引起复合物的解离；温度降低，反应速度减慢，但抗原抗体结合牢固，易于观察。 某些特殊的抗原抗体反应需要特殊的温度，如冷凝集素在4?C时与红细胞结合，20?C以上反而解离。 4．作用时间 三、应用原则 用已知抗体找抗原：一般具有诊断价值； 用已知抗原找抗体：一般具有辅助诊断价值。 检测目的：定性、定量、定位。 四、抗原或抗体的检测方法 根据抗原物理性状、抗体类型及参加反应的成份不同，抗原抗体反应类型包括： （一）凝集反应（agglutination） 见图 1．直接凝集反应（direct agglutination） 有玻片法和试管法两种，前者用于定性诊断，后者用于定量检测。 2．间接凝集反应（indirect agglutination） 又称为被动凝集试验（passive agglutination test）。 （1）（正向）间接凝集试验：用于抗体； （2）反向间接凝集试验：用于检测抗原； （3）间接凝集抑制试验（indirect agglutination inhibition test）：用于检测抗原； 临床上常用以胶乳颗粒作为载体的正向间接凝集抑制试验检测尿液标本中的绒毛膜促性腺激素（HCG）作为妊娠的早期诊断。 3．抗球蛋白试验（antiglobulin test） 由Coombs在1945年首创，故又称Coombs试验。该试验可分为直接、间接两种检测方法。 (1)直接Coombs试验：用于检测已粘附在红细胞表面上的不完全抗体。常用于诊断自身免疫性溶血性贫血和新生儿溶血症，也可用来检测药物诱导的溶血和输血导致的同种免疫反应等。 (2)间接Coombs试验：用于检测游离在血清中的不完全抗体。常用于检测母体的Rh（D）抗体，有助于及早发现及避免新生儿溶血症的发生。也可对不相容输血后产生的血型抗体进行检测。 （二）沉淀反应（precipitation） 根据沉淀反应的介质和检测方法不同，沉淀反应可分为液相沉淀反应、凝胶中的沉淀反应和免疫比浊测定等类型。 1．液相沉淀反应 （1）絮状沉淀试验（flocculation precipitation test