【电子教案】SRY 基因的检测.pdfVIP

SRY 基因的检测 【教学对象与学时】 教学对象：临床医学七年制及五年制本科生 学时：4 学时 【预习要求】 PCR 反应的基本原理。 性别检测的基本原理。 性别检测的基本应用。 【目的要求】 掌握PCR 反应的基本原理。 掌握性别决定的分子机制。 掌握用PCR 扩增检测性别的方法。 掌握用PCR 扩增检测性别方法的应用。 【重点和难点】 重点：如何判断性别结果 难点：性别判断方法的应用理论 【教学过程设计】 课前提问； 讲解原理及步骤 注意事项； 学生分组实验； 讨论和总结； 【课前提问】 如何用PCR 技术鉴定性反转综合征46 ，XX 的患者？ SRY 基因片段检测为阳性结果。 如何用PCR 技术鉴定性反转综合征46 ，XY 的患者？ SRY 基因片段检测为阴性结果。 人类个体的表型性别是由哪种基因决定的？ SRY 基因。 SRY 基因片段检测性别具有广泛的实际应用价值？ 确认SRY 所在区域的缺失或易位，诊断46 ，XY 女性或46 ，XX 男性性反 转综合征的患者；预防甲型血友病、G6PD 缺乏症等X 连锁隐性遗传病患儿的出 生判断异性别的骨髓移植程度；法医学上尸块或血斑的性别确定；大量标本的运 动员体检。 【课前讲解】 PCR 反应的基本原理。 性别决定的 SRY 分子机制。 PCR 扩增检测性别方法的应用。 【实验讲解】 一、实验目的： 掌握PCR 反应的基本原理 掌握性别决定的分子机制 掌握用PCR 扩增检测性别的方法 掌握用PCR 扩增检测性别方法的应用 二、实验器材与试剂： 器材：加样器、紫外投射仪、电泳仪、PCR 扩增仪 试剂：由微量外周血标本制备模板、DNA 细胞裂解缓冲液、(SDS 蛋白酶 K) 、酚：氯仿：异戊醇(25：24：1 体积比) 、3mol 醋酸钠(pH5.2)、无水乙醇，-20℃ 保存、70% 乙醇，-20℃保存、TE 缓冲液 PCR 检测性别试剂与材料： 上、下游引物(各5μmol/L) 模板 DNA 溶液 10×PCR 缓冲液：(高压灭菌) dNTPs 溶液(2.5mmol/L 原液) Taq DNA 聚合酶(5U/μl) 琼脂糖凝胶电泳分离 DNA 片段 电泳级琼脂糖 电泳缓冲液：5×TBE 贮存液 5mg/ml 的溴化乙锭溶液，4 ℃暗存。 上样缓冲液：0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青，30%甘油于水中。4 ℃贮存。 三、实验过程与步骤 (一)SRY 基因引物设计 Y1.5 5＇-CTA GAC CGC AGA GGC GCC AT-3＇ Y1.6 5＇-TAG TAC CCA CGC CTG CTC CGG-3＇ 扩增 DNA 片段长度 239bp (二) PCR 反应 1、在 0.5ml Eppendorf管中依次加入H O 60.5μl 2 10×PCR 缓冲液 10μl dNTPs 溶液(2.5mmol/L 原液) 8μl(0.2mmol/L) 上游引物(5μmol/L) 10μl (0.5μmol/L) 下游引物(5μmol/L) 10μl(0.5μmol/L) 模板DNA 溶液(基因组DNA 溶液) 1μl Taq DNA 聚合酶(5U/μl) 0.5μl(2.5U/100μl) 总